应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 双酶切得到的500bp的片段回收效果不好，是怎么个情况？
91/1返回列表
查看: 1744  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Lopick

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切得到的500bp的片段回收效果不好，是怎么个情况？ 已有6人参与

我的质粒全长3000多bp   双酶切后得到2000bp和500bp两个片段  可是前者亮度较好  后者亮度较浅    要回收500bp  可是回收后跑胶没条带   请问各位大神  这是神马情况啊？？？

双酶切得到的500bp的片段回收效果不好，是怎么个情况？
ab shuangmeiqie2014-10-23 16hr 55min_副本.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-01 21:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Lopick: 金币+1 2014-11-02 16:44:17
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-02 21:59:54
你可以看一下成像的原理，小片段相对大片段不亮是合理的，你可以增加以下模板的量，因为回收本来就有一定的效率，目的片段太少了，回收过程中损失太多了……
赞一下 回复此楼
他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2014-11-02 00:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Thomas_T

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Lopick: 金币+2 2014-11-02 16:44:06
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-02 22:00:01
小片段回收是比较麻烦，我前段时间也出现过这个问题，首先应该用试剂盒给的TE，因为TE是弱碱性的，有利于DNA的溶解，我前段时间用灭菌水要过一直不好，因为这个水有点偏酸性了。。另外，在最后一步离心下来的DNA溶液再放到柱子上离心一下，这样会提高回收率。当然了，最后加TE的时候最好60度预热一下。
祝你成功~
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-02 09:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Lopick: 金币+1 2014-11-02 16:44:11
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-02 22:00:06
目测质粒浓度太低，增加酶切质粒的量是最有效的解决办法。。。
另外，我一般回收后都直接测定浓度，不再跑电泳检测的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-02 13:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只要有就可以往下做，不必在意量。大不了下步连接全部加上

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-02 16:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lopick

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Thomas_T at 2014-11-02 09:53:16
小片段回收是比较麻烦，我前段时间也出现过这个问题，首先应该用试剂盒给的TE，因为TE是弱碱性的，有利于DNA的溶解，我前段时间用灭菌水要过一直不好，因为这个水有点偏酸性了。。另外，在最后一步离心下来的DNA溶液 ...

你好  很感谢你的答复  方便留个联系方式吗？  最近做的有点不顺利，想请教您一下。
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-02 16:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有的时候即使看不到条带也能出来结果的，多试几次看看。
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-02 17:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Thomas_T

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Lopick at 2014-11-02 16:43:56
你好  很感谢你的答复  方便留个联系方式吗？  最近做的有点不顺利，想请教您一下。...

1007065296
回复此楼
8楼2014-11-02 20:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-11-02 22:00:23
Lopick: 金币+1 2014-11-03 08:33:16
1、目测你的酶切好像不完全，多切点时间不急做分子实验
2、凝胶回收注意：低温核酸容易结合在柱子上，所以溶胶液可以冷却在4°冰箱2min，然后离心。
3、高温核酸易分离，所以用60°的洗脱液洗脱，那么你得到的回收率可以达到90%以上
暂时给你这么多意见吧
赞一下 回复此楼
9楼2014-11-02 21:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Lopick 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +21 好好休息好不好 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 16:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385，求调剂 +6 Ezra_Zhang 2026-04-09 6/300 2026-04-10 16:23 by 高维春
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 求调剂 +7 璃茉一定上岸 2026-04-10 7/350 2026-04-10 15:25 by jiajinhpu
[考研] 277求调剂 +19 倪建设 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:24 by guosr9609
[考研] 086003调剂求助 +19 苏弋万 2026-04-09 20/1000 2026-04-09 20:48 by bljnqdcc
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所，有机化学356分找调剂 +11 Nadiums 2026-04-09 11/550 2026-04-09 18:04 by lijunpoly
[考研] 考研调剂 +13 冰冰，，， 2026-04-07 13/650 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 353求调剂 +8 晴空万里air 2026-04-07 8/400 2026-04-09 00:18 by GouQ
[考研] 307分材料专业求调剂 +12 Hll胡 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:33 by luoyongfeng
[考研] 281求调剂 +10 椰子蘑菇 2026-04-06 10/500 2026-04-08 11:43 by zzucheup
[考研] 调剂求助（生物与医药） +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 277、学硕，求调剂 数一104， +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 机械专硕274求调剂，不挑专业学校 +6 泛泛2333 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:06 by 泛泛2333
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 材料调剂 +9 革微桂 2026-04-04 9/450 2026-04-05 08:27 by 544594351
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 一志愿南农090401，268，求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭