应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段基因3.9K克隆不出来，求助
441/5返回列表12345下一页
查看: 4320  |  回复: 43
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

生化与分子

新虫 (初入文坛)

[交流] 长片段基因3.9K克隆不出来，求助 已有34人参与

各位坛友好：
    我最近在构建一个重组载体，目的基因片段3.9K，已经克隆了近两周了，使用的是普通Taq酶，一直没有克隆出来，请有经验的坛友帮忙出出主意，谢谢啦！

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:53 ]
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

panda73 hy_sandra

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-09 10:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换个酶吧。虽然理论上普通taq可以P出来。再说，3.9kb的片段最好用高保真酶，否则出错了还要重新克隆。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-03-09 11:18:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

panda73

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
推荐使用Takara的Primestar 高保真，高扩增效率，我们实验室一直用这个酶
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-09 15:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hy_sandra

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
如果是要?慕M織弄出這麼大的片段，除了酵素要好之外，溶解組織的效率也要好，還有當初我把微量作出的片段?哪z中挖出，再PCR一次, 產量就很多了，可用?斫嬞|體

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
科研是無止盡的
4楼2013-03-09 16:06:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2013-03-09 18:49:44
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

三撇五撇

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
普通Taq酶能扩出来 最近我都扩了好几条都是3k-5k的
用两步法：95度 3min20s
              98度 13s
              68度   4min
              72度   10min
     2-3循环23个循环   OK 搞定
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-09 19:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这么大片段，普通taq酶一般是扩不出来的，建议你还是换个酶用吧。
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
7楼2013-03-09 21:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
8楼2013-03-09 21:43:35
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

554526385

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
选用高保真酶。注意primerstart是P的平末端。
赞一下 回复此楼
我存在
9楼2013-03-09 22:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

137167741

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一、换高保真的酶
第二、检测模板质量，做几个内参
第三、考虑引物设计问题
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
10楼2013-03-10 10:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生化与分子 的主题更新
441/5返回列表12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭