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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段基因3.9K克隆不出来，求助
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三撇五撇

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
30楼: Originally posted by 玲珑琉璃 at 2014-02-13 14:23:36
就是退火温度和延伸温度是一样的吗？
一般情况下退火温度都是68度吗，还是因酶而异呢？...

一般正常的方法扩不出来时，上述两步法是个很好的选择。就是把正常的退火和延伸合并成一步了。根据GC含量，68度可以上下浮动3度试试
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31楼2014-02-13 18:48:25
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同意楼上许多人，建议楼主使用primer star Max或者phusion，快狠准。
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32楼2014-02-14 21:24:17
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ccttss1

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换高保真酶，加长延伸时间。
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33楼2014-02-14 21:28:31
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玲珑琉璃

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
31楼: Originally posted by 三撇五撇 at 2014-02-13 18:48:25
一般正常的方法扩不出来时，上述两步法是个很好的选择。就是把正常的退火和延伸合并成一步了。根据GC含量，68度可以上下浮动3度试试...

好的，我再试试，多谢！
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一个不成熟男人的标志是他愿意为某种事业英勇地死去，一个成熟男人的标志是他愿意为某种事业卑贱地活着。━━━塞林格
34楼2014-02-15 16:19:45
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玲珑琉璃

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
32楼: Originally posted by huangrui1988 at 2014-02-14 21:24:17
同意楼上许多人，建议楼主使用primer star Max或者phusion，快狠准。

好的，收到！谢谢！
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一个不成熟男人的标志是他愿意为某种事业英勇地死去，一个成熟男人的标志是他愿意为某种事业卑贱地活着。━━━塞林格
35楼2014-02-15 16:20:25
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玲珑琉璃

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
33楼: Originally posted by ccttss1 at 2014-02-14 21:28:31
换高保真酶，加长延伸时间。

好的，谢谢！
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一个不成熟男人的标志是他愿意为某种事业英勇地死去，一个成熟男人的标志是他愿意为某种事业卑贱地活着。━━━塞林格
36楼2014-02-15 16:20:57
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不能直接酶切连接吗？加点甜菜碱，用KOD酶试试。
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37楼2014-02-15 16:46:15
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elise1987

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
宝生物好像有hot start 的LA酶。试试看。其实引物和温度比较关键。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
38楼2014-02-15 17:27:44
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王希望

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panda73 at 2013-03-09 15:42:47
推荐使用Takara的Primestar 高保真，高扩增效率，我们实验室一直用这个酶

是啊
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39楼2014-02-18 08:28:42
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加点甜菜碱，把延伸时间算准。
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40楼2014-02-18 17:13:50
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