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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段基因3.9K克隆不出来，求助
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283503264

银虫 (小有名气)
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21楼: Originally posted by baihaer at 2014-02-07 22:10:58
哥们，我觉得您的68度有点高哈，一般退火温度应该是根据你的引物长度和GC比来推算的，一般公司合成的引物都会附有建议的退火温度。而且72度延伸温度，时间一般不用那么久，一般是1k/1min所以3.9k最多4.5min就可以， ...

这是两步法，68度的是退火和延伸一起来的，所以时间相当于延伸时间。72度不是循环里面的
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41楼2014-06-25 13:53:31
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liuevans

木虫 (正式写手)
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14楼: Originally posted by biosci at 2013-03-10 21:43:09
小菜一碟。我7k的都克隆过，一点问题没有

你好，请问你对于长片段克隆是不是比较了解，我想克隆一个3K的片段，里面存在重复序列（重复单元100-200bp），请问选择什么载体比较好，然后是否在测序的时候存在测不通的问题，谢谢了
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42楼2014-08-30 18:42:31
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liuevans

木虫 (正式写手)
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15楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2013-03-10 22:52:37
3.9kb还是比较容易的，我经常克隆5-8kb的没有问题啊.

你好，请问你对于长片段克隆是不是比较了解，我想克隆一个3K的片段，里面存在重复序列（重复单元100-200bp），请问选择什么载体比较好，然后是否在测序的时候存在测不通的问题，谢谢了
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43楼2014-08-30 18:42:57
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蓝天勇士

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也如此啊，你扩增的时候最后的72度延伸多长时间？
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44楼2014-11-26 17:54:26
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