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银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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21楼: Originally posted by baihaer at 2014-02-07 22:10:58
哥们,我觉得您的68度有点高哈,一般退火温度应该是根据你的引物长度和GC比来推算的,一般公司合成的引物都会附有建议的退火温度。而且72度延伸温度,时间一般不用那么久,一般是1k/1min所以3.9k最多4.5min就可以, ...

这是两步法,68度的是退火和延伸一起来的,所以时间相当于延伸时间。72度不是循环里面的
Action is the food and drink which will nourish my success.
41楼2014-06-25 13:53:31
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liuevans

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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14楼: Originally posted by biosci at 2013-03-10 21:43:09
小菜一碟。我7k的都克隆过,一点问题没有

你好,请问你对于长片段克隆是不是比较了解,我想克隆一个3K的片段,里面存在重复序列(重复单元100-200bp),请问选择什么载体比较好,然后是否在测序的时候存在测不通的问题,谢谢了
42楼2014-08-30 18:42:31
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liuevans

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2013-03-10 22:52:37
3.9kb还是比较容易的,我经常克隆5-8kb的没有问题啊.

你好,请问你对于长片段克隆是不是比较了解,我想克隆一个3K的片段,里面存在重复序列(重复单元100-200bp),请问选择什么载体比较好,然后是否在测序的时候存在测不通的问题,谢谢了
43楼2014-08-30 18:42:57
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蓝天勇士

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也如此啊,你扩增的时候最后的72度延伸多长时间?
44楼2014-11-26 17:54:26
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