24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3664  |  回复: 43

baihaer

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 三撇五撇 at 2013-03-09 19:32:11
普通Taq酶能扩出来 最近我都扩了好几条都是3k-5k的
用两步法:95度 3min20s
              98度 13s
              68度   4min
              72度   10min
     2-3循环23个循环   OK 搞定

哥们,我觉得您的68度有点高哈,一般退火温度应该是根据你的引物长度和GC比来推算的,一般公司合成的引物都会附有建议的退火温度。而且72度延伸温度,时间一般不用那么久,一般是1k/1min所以3.9k最多4.5min就可以,PCR时间太长容易造成产物的突变。
没有SB的事,只有SB的人
21楼2014-02-07 22:10:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

780715510

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主好,我们上海捷瑞生物工程有限公司 专业合成基因片段。可以让我们帮你合成
22楼2014-02-08 13:17:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三撇五撇

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by baihaer at 2014-02-07 22:10:58
哥们,我觉得您的68度有点高哈,一般退火温度应该是根据你的引物长度和GC比来推算的,一般公司合成的引物都会附有建议的退火温度。而且72度延伸温度,时间一般不用那么久,一般是1k/1min所以3.9k最多4.5min就可以, ...

仅仅经验之谈,一般都能搞定
23楼2014-02-08 22:29:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三撇五撇

银虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 780715510 at 2014-02-08 13:17:48
楼主好,我们上海捷瑞生物工程有限公司 专业合成基因片段。可以让我们帮你合成

价格如何?
24楼2014-02-08 22:30:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

b6122

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
延长延伸时间试试。还有确定引物没有问题。

[ 发自小木虫客户端 ]
25楼2014-02-09 01:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhs521521

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这么长的片段还是要高保真酶给力,我用primerstar P过2K多的,测序正确,如果片段里GC含量高,那就更得注意了!
寻找真正的自我!
26楼2014-02-09 10:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问您是什么物种,什么模板?没准我能帮到您!
27楼2014-02-10 10:42:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
其实有时候普通的taq酶最好用,反而一些高保真的taq酶不利于扩增。真的实验室里很多师兄师姐都这样说过。
我不会!
28楼2014-02-12 15:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fangchen8678

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个还是选用高保真酶吧,普通taq酶适用条件宽但是扩长片段就有点吃力。还有并不是说高保真酶扩不好,恰恰是因为保真性高所以对体系要求严格罢了。

[ 发自小木虫客户端 ]
29楼2014-02-12 21:05:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玲珑琉璃

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 三撇五撇 at 2013-03-09 19:32:11
普通Taq酶能扩出来 最近我都扩了好几条都是3k-5k的
用两步法:95度 3min20s
              98度 13s
              68度   4min
              72度   10min
     2-3循环23个循环   OK 搞定

就是退火温度和延伸温度是一样的吗?
一般情况下退火温度都是68度吗,还是因酶而异呢?
一个不成熟男人的标志是他愿意为某种事业英勇地死去,一个成熟男人的标志是他愿意为某种事业卑贱地活着。━━━塞林格
30楼2014-02-13 14:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生化与分子 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料求调剂一志愿哈工大324 +5 闫旭东 2026-03-28 6/300 2026-03-28 03:30 by fmesaito
[考研] 求调剂 +6 白QF 2026-03-21 7/350 2026-03-28 00:42 by 白QF
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +5 脚滑的守法公民 2026-03-27 5/250 2026-03-27 22:50 by lcl13500..
[考博] 26申博 +3 加油冲啊! 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 085600,材料与化工321分,求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 0856求调剂 +8 zhn03 2026-03-25 9/450 2026-03-26 13:42 by zzll406
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见