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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段基因3.9K克隆不出来，求助
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生化与分子

新虫 (初入文坛)

[交流] 长片段基因3.9K克隆不出来，求助 已有34人参与

各位坛友好：
    我最近在构建一个重组载体，目的基因片段3.9K，已经克隆了近两周了，使用的是普通Taq酶，一直没有克隆出来，请有经验的坛友帮忙出出主意，谢谢啦！

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:53 ]
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panda73 hy_sandra

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1楼 2013-03-09 10:43:19
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三蛰

铜虫 (小有名气)
★
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其实有时候普通的taq酶最好用，反而一些高保真的taq酶不利于扩增。真的实验室里很多师兄师姐都这样说过。
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我不会！
28楼2014-02-12 15:53:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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换个酶吧。虽然理论上普通taq可以P出来。再说，3.9kb的片段最好用高保真酶，否则出错了还要重新克隆。
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2楼2013-03-09 11:18:24
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panda73

金虫 (小有名气)
★
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送鲜花一朵
推荐使用Takara的Primestar 高保真，高扩增效率，我们实验室一直用这个酶
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3楼2013-03-09 15:42:47
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)
★
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送鲜花一朵
如果是要?慕M織弄出這麼大的片段，除了酵素要好之外，溶解組織的效率也要好，還有當初我把微量作出的片段?哪z中挖出，再PCR一次, 產量就很多了，可用?斫嬞|體

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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科研是無止盡的
4楼2013-03-09 16:06:52
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