24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

生化与分子

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1.5
帖子: 12
在线: 6.1小时
虫号: 1881067
注册: 2012-07-06
专业: 生物化学

[交流] 长片段基因3.9K克隆不出来，求助已有34人参与

各位坛友好：
我最近在构建一个重组载体，目的基因片段3.9K，已经克隆了近两周了，使用的是普通Taq酶，一直没有克隆出来，请有经验的坛友帮忙出出主意，谢谢啦！

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:53 ]

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

panda73

hy_sandra

» 猜你喜欢

HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有157人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复

1楼 2013-03-09 10:43:19

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

玲珑琉璃

铜虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1201.3
散金: 605
红花: 7
帖子: 378
在线: 253.6小时
虫号: 2039708
注册: 2012-10-01
专业: 基因表达调控与表观遗传学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

6楼: Originally posted by 三撇五撇 at 2013-03-09 19:32:11
普通Taq酶能扩出来最近我都扩了好几条都是3k-5k的
用两步法：95度 3min20s
            98度 13s
            68度 4min
            72度 10min
   2-3循环23个循环 OK 搞定

就是退火温度和延伸温度是一样的吗？
一般情况下退火温度都是68度吗，还是因酶而异呢？