应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段基因3.9K克隆不出来，求助
441/5返回列表12345下一页
查看: 3642  |  回复: 43
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

生化与分子

新虫 (初入文坛)

[交流] 长片段基因3.9K克隆不出来，求助 已有34人参与

各位坛友好：
    我最近在构建一个重组载体，目的基因片段3.9K，已经克隆了近两周了，使用的是普通Taq酶，一直没有克隆出来，请有经验的坛友帮忙出出主意，谢谢啦！

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:53 ]
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

panda73 hy_sandra

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-09 10:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换个酶吧。虽然理论上普通taq可以P出来。再说，3.9kb的片段最好用高保真酶，否则出错了还要重新克隆。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-03-09 11:18:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

panda73

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
推荐使用Takara的Primestar 高保真，高扩增效率，我们实验室一直用这个酶
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-09 15:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hy_sandra

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
如果是要?慕M織弄出這麼大的片段，除了酵素要好之外，溶解組織的效率也要好，還有當初我把微量作出的片段?哪z中挖出，再PCR一次, 產量就很多了，可用?斫嬞|體

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
科研是無止盡的
4楼2013-03-09 16:06:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2013-03-09 18:49:44
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

三撇五撇

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
普通Taq酶能扩出来 最近我都扩了好几条都是3k-5k的
用两步法：95度 3min20s
              98度 13s
              68度   4min
              72度   10min
     2-3循环23个循环   OK 搞定
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-09 19:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这么大片段，普通taq酶一般是扩不出来的，建议你还是换个酶用吧。
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
7楼2013-03-09 21:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
8楼2013-03-09 21:43:35
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

554526385

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
选用高保真酶。注意primerstart是P的平末端。
赞一下 回复此楼
我存在
9楼2013-03-09 22:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

137167741

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一、换高保真的酶
第二、检测模板质量，做几个内参
第三、考虑引物设计问题
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
10楼2013-03-10 10:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生化与分子 的主题更新
441/5返回列表12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-16 01:21 by Xttdmn
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 321求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-15 3/150 2026-03-15 17:48 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +11 enenenhui 2026-03-13 12/600 2026-03-14 21:48 by laoshidan
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 328，0703考生求调剂，一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭