应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段基因3.9K克隆不出来，求助
442/5返回列表上一页12345下一页
查看: 4250  |  回复: 43
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这么长的片段要用高保真的聚合酶才行，而且效率要高，推荐NEB的Phusion DNA polymerase或者国产的全式金FastPfu。
克隆的时候可以考虑Circular polymerase extension cloning，完全不用限制酶和连接酶的操作步骤。
http://www.plosone.org/article/i ... ournal.pone.0006441
http://www.nature.com/nprot/journal/v6/n2/abs/nprot.2010.181.html
赞一下 回复此楼
11楼2013-03-10 12:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

熊大斌

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换一个酶试试，普通Taq在扩大片段时，活性可能的不会保持到底，有LA Taq试试，大片段我们都扩过，效果还不错。
赞一下 回复此楼
12楼2013-03-10 15:00:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenchenky

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我经常克隆长片段，可以加我QQ讨论1922008223
赞一下 回复此楼
13楼2013-03-10 19:30:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小菜一碟。我7k的都克隆过，一点问题没有
赞一下 回复此楼
14楼2013-03-10 21:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
3.9kb还是比较容易的，我经常克隆5-8kb的没有问题啊.
赞一下 回复此楼
15楼2013-03-10 22:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2013-03-10 22:52:37
3.9kb还是比较容易的，我经常克隆5-8kb的没有问题啊.

都不突变吗？话说我几个月就得到1个目的基因
赞一下 回复此楼
16楼2013-03-11 22:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
14楼: Originally posted by biosci at 2013-03-10 21:43:09
小菜一碟。我7k的都克隆过，一点问题没有

都不突变吗？话说我几个月就得到1个目的基因
赞一下 回复此楼
17楼2013-03-11 22:34:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏尔list

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
高保真只是确定保证性的
可以用LA taq或者你在网上找找其他扩增长片段的酶
做实验还是要自己试一下
两个星期扩不出来很正常
赞一下 回复此楼
18楼2013-03-11 22:54:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)
太省钱了
回复此楼
19楼2013-03-12 00:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议使用长片段PCR相关的产品，长片段PCR中使用的酶一般都是混合酶，其保真性要比普通Taq酶高，扩增出来的片段末端是加A的，可直接用于T-A克隆，上海生工最近刚出来的长片段PCR扩增产品，我已经使用过了，效果不错，我扩增的是5kb，扩增效果很好，测序保真性也很好。
赞一下 回复此楼
rainwater
20楼2014-02-06 14:33:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生化与分子 的主题更新
442/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:12 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:33 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭