应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
51/1返回列表
查看: 6884  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了 已有1人参与

各位大虫，小弟最近扩增质粒，出现了怪现象，我的质粒转化的DH5a，挑取单克隆，再摇菌，提取质粒，跑胶发现质粒有很多条带，四条或者五条，就算是有超螺旋的和线性的，算起来也只有三条，不可能有四五条啊。我用BamH1 酶切（只有一个酶切位点），发现只有一条带。用EcoR1 酶切（只有一个酶切位点），也是一条带，用Sal 1 酶切（该质粒中无此酶酶切位点），发现切不开，条带和跑质粒一样。如果污染了其他质粒的话，用三种酶至少应该有个酶能切开污染的质粒吧，但都没发现杂带。如果没有污染其他质粒的话，质粒跑出来最多也是三条带啊，我这怎么出现了四五条。纠结啊…………，请各位给指点一二！
图片中 P：质粒，大约5000bp。
       Bam：BamH1酶切质粒
       Sal:    Sal1 酶切质粒
       Eco：EcoR1酶切的质粒
两个方框是单独挑取的两个菌落分别提的质粒。最左边和中间的是Marker5000。

0.8%Agarose
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

杂项

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-10 11:27:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从你的描述来看，不应该是污染，就是你制备质粒时不小心（没有严格按照试剂盒的建议，该轻柔的就该轻柔），导致质粒中包含多种形式，其实，这种情况比较常见，但也意味着你的质量不太好。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-04-10 20:28:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)
图中质粒的泳道，能明显看出五条带啊（箭头指示）
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-10 11:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-10 18:37:35
嗯...............
我也有跑出来五条带过，怀疑是提质粒时，gDNA污染，不过也觉得没有关系，转化时gDNA又不会转进去，况且后面还要再鉴定，你拿三个内切酶去做了鉴定，我这么干的话要是偶老板知道了....下场就惨了，所以个人看法，没有其他质粒污染的。
祝实验顺利 若有说错希望高手指点
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
3楼2012-04-10 11:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)
呵呵，谢啦，实验室别的不多，内切酶还够用。请问如果是gDNA 污染的话，那么我拿这个质粒再次转化，再次提起质粒的话，会不会就会消除这些多余的带呢？
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-10 14:54:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:30 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:19 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:37 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:35 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 3/150 2026-08-30 19:26 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:17 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭