应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么条带很细啊？郁闷呢！
101/1返回列表
查看: 1486  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

350784478

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】为什么条带很细啊？郁闷呢！ 已有4人参与

您好！我最近在提蛋白做Western blot，我是用碧云天裂解液裂解肿瘤组织（-80°放置一个月吧），然后再加入PMSF，冰上研磨10分钟，倒入EP管中，超声波振荡15s，13000rpm，4°离心15min，然后就发现EP管上面有白色的东西，非常粘稠，请问一下这个是蛋白吗？
再次，上样的体积是20ul，电泳完之后采用考马斯亮蓝染色。染出结果很差，每次条带都很细，基本看不到，即使我把体积加大，也还是没有什么变化啊，这个是什么原因呢？还请各位帮忙解决我的困惑，非常感谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
1楼 2010-11-19 18:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oditors

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-24 08:22:17
你有没有参考他的说明书啊？我现在也在用碧云天的蛋白裂解液，但是我的那个PMSF是要用的时候就加到裂解液里面的！你去看看他的说明书吧
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-11-24 01:09:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

350784478

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by oditors at 2010-11-24 01:09:13:
你有没有参考他的说明书啊？我现在也在用碧云天的蛋白裂解液，但是我的那个PMSF是要用的时候就加到裂解液里面的！你去看看他的说明书吧

我也是要用的时候加的，用之前几分钟加的。都不知道是哪方面出现问题的。
赞一下 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2010-11-24 12:38:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oditors

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 350784478 at 2010-11-24 12:38:14:

我也是要用的时候加的，用之前几分钟加的。都不知道是哪方面出现问题的。

你前面不是说你加了裂解液在组织里面过来一个月再加PMSF吗？还有一个就是你裂解的不充分，蛋白太少了！我做细胞的就是这样，裂解之后测浓度，显示浓度太低了，建议你有条件的话就进行浓缩，没条件就减少裂解液，增加组织以及裂解时间来提高蛋白浓度！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-11-24 13:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

350784478

木虫 (正式写手)
[quote]Originally posted by oditors at 2010-11-24 13:45:38:

你前面不是说你加了裂解液在组织里面过来一个月再加PMSF吗？还有一个就是你裂解的不充分，蛋白太少了！我做细胞的就是这样，裂解之后测浓度，显示浓度太低了，建议你有条件的话就进行浓缩，没条件就减少裂解液， ... [/quote
对不起，是我说的没有清楚，我的意思是肿瘤组织-80°放置了一个月，然后我才提蛋白的，而不是裂解液。
赞一下 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
5楼2010-11-24 16:31:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oditors

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 350784478 at 2010-11-24 16:31:33:
[quote]Originally posted by oditors at 2010-11-24 13:45:38:

你前面不是说你加了裂解液在组织里面过来一个月再加PMSF吗？还有一个就是你裂解的不充分，蛋白太少了！我做细胞的就是这样，裂解之后测浓 ...

哦哦，呵呵。那应该是裂解下来的蛋白了太少了，我现在也在犯这个问题
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-11-24 18:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流，热心 2010-11-25 14:17:39
原因应该是组织或细胞太少，表达量太低。
PMSF什么时候加影响不会太大，PMSF只是蛋白酶抑制剂，不加也不一定就是讲解。加了也不一定不会降解。
楼主可以把组织直接用少量液体（什么液体不重要）悬浮，然后沸水煮几分钟，直接上样电泳。
比如你取一点组织在100ul水中，加入loading buffer,煮了后电泳就ok了。
赞一下(2人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
7楼2010-11-24 18:31:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

350784478

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by oditors at 2010-11-24 18:19:03:

哦哦，呵呵。那应该是裂解下来的蛋白了太少了，我现在也在犯这个问题

关键是我做提取细胞的时候，就不会出现这样的情况，我细胞提取蛋白很好，一点问题都没有。
赞一下 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
8楼2010-11-25 11:29:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oditors

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 350784478 at 2010-11-25 11:29:30:

关键是我做提取细胞的时候，就不会出现这样的情况，我细胞提取蛋白很好，一点问题都没有。

这个应该这样说，养的细胞都是比较分散的，容易裂解，而组织块，细胞太多，不易裂解，建议增加裂解时间。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-11-25 18:21:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wind-flying

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.是蛋白
2.蛋白浓度太低，提蛋白前细胞太少
赞一下 回复此楼
Travelingaroundtheworld
10楼2014-04-23 12:52:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 350784478 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 0856求调剂285 +8 吕仔龙 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by 刘兵
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +3 15779376950 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:27 by 15779376950
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 306分材料调剂 +3 chuanzhu川烛 2026-03-01 4/200 2026-03-01 12:32 by houyaoxu
[考研] 272求调剂 +5 材紫有化 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:51 by gaoxiaoniuma
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭