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为什么我提的质粒只有一条带?
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tayifeita
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[交流]
为什么我提的质粒只有一条带?
用碱裂解法提取的质粒。质粒大小是10kb.中间是1kb的marker。分别是10kb,8kb,6kb,5kb,4kb,3.5kb.3kb.2.5kb.2kb,1.5kb,1kb,750bp,500bp,250bp.
marker左边和右边都是提取的同一种质粒
15.jpg
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2014-01-05 16:23:23
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xiaoyugutou
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流
2014-01-05 18:44:01
tayifeita: 金币+2
2014-01-06 17:01:24
提取的状态好是一条带,状态不好是三条带,另外你提的质粒RNA污染太多了。再有环状的质粒是不能用maker准确参考大小的,maker都是线性的。
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3楼
2014-01-05 17:27:46
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2014-01-05 20:21:39
tayifeita: 金币+2
2014-01-06 17:01:38
可以放心用,如果是在不确定就做一个酶切,一切就明了了!
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5楼
2014-01-05 20:02:59
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不叶珏
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2014-01-06 17:01:29
有的质粒就只有一条带的
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2楼
2014-01-05 16:52:47
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tayifeita
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2楼
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不叶珏
at 2014-01-05 16:52:47
有的质粒就只有一条带的
我提的质粒一般都是10kb以下,碱裂解法提的话之后跑电泳一般都是两条带,一条超螺旋,一条有缺刻的环状。不知道你说的一条怎解?
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6楼
2014-01-06 13:22:35
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tayifeita
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xiaoyugutou
at 2014-01-05 17:27:46
提取的状态好是一条带,状态不好是三条带,另外你提的质粒RNA污染太多了。再有环状的质粒是不能用maker准确参考大小的,maker都是线性的。
一般用试剂盒提是一条带,目前我知道的用碱裂解法提的没有这样的现象。线性质粒在环状和超螺旋质粒之间,用marker是为了大概估算线性质粒大小,这次只提出一条带,所以很困惑是不是质粒大小的原因,另外我对质粒要求不高所以没有用rna酶处理。
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7楼
2014-01-06 13:27:53
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tayifeita
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三蛰
at 2014-01-05 20:02:59
可以放心用,如果是在不确定就做一个酶切,一切就明了了!
我也是这么想的,主要是以前没用碱裂解法提过10kb以上的质粒,不知道大质粒提取用什么方法比较好。
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8楼
2014-01-06 13:30:40
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tayifeita
at 2014-01-06 13:22:35
我提的质粒一般都是10kb以下,碱裂解法提的话之后跑电泳一般都是两条带,一条超螺旋,一条有缺刻的环状。不知道你说的一条怎解?
...
具体我也不清楚 做了这么多种质粒 有的质粒就是只有一条带 有的就两条带分的很开 有的三条带
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9楼
2014-01-06 22:07:13
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6楼
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tayifeita
at 2014-01-06 13:22:35
我提的质粒一般都是10kb以下,碱裂解法提的话之后跑电泳一般都是两条带,一条超螺旋,一条有缺刻的环状。不知道你说的一条怎解?
...
具体我也不清楚 做了这么多种质粒 有的质粒就是只有一条带 有的就两条带分的很开 有的三条带
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10楼
2014-01-06 22:07:22
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