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质粒提取和扩增鉴定
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从别人那里借来的滤纸上面的质粒,无菌水溶了以后,用感受态转了.天根的. 涂板后,14小时,长出众多单菌落.阴性对照无菌落生成. 挑单菌落,5ml试管摇管,12小时. 一共5个管,两个有浑浊,另外三个没反应.取浑浊的两个其中一个抽提质粒. 提出来一个不到5000bp的单一条带 但是我借的质粒是pcDNA3.1, 大小是5400左右呀... 那我提取的是啥东西呀... 如果我要鉴定是不是用两个不同的单酶切一下? 还是因为我marker没有完全跑开?但是挺明显目标条带不到5000,因为marker指示条带是5000的.. 如果说是污染了杂菌,我总不能刚好是实验组污染,阴性对照就没污染吧... 还是说我挑单菌落的时候有的挑的的多,有的挑的少导致有的试管不长... 求问解决办法? |
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