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tayifeita

木虫 (小有名气)

[交流] 为什么我提的质粒只有一条带？

用碱裂解法提取的质粒。质粒大小是10kb.中间是1kb的marker。分别是10kb,8kb,6kb,5kb,4kb,3.5kb.3kb.2.5kb.2kb,1.5kb,1kb,750bp,500bp,250bp.
marker左边和右边都是提取的同一种质粒
为什么我提的质粒只有一条带？
15.jpg
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1楼 2014-01-05 16:23:23
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xiaoyugutou

捐助贵宾 (小有名气)
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-05 18:44:01
tayifeita: 金币+2 2014-01-06 17:01:24
提取的状态好是一条带，状态不好是三条带，另外你提的质粒RNA污染太多了。再有环状的质粒是不能用maker准确参考大小的，maker都是线性的。
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3楼2014-01-05 17:27:46
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三蛰

铜虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-05 20:21:39
tayifeita: 金币+2 2014-01-06 17:01:38
可以放心用，如果是在不确定就做一个酶切，一切就明了了！
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5楼2014-01-05 20:02:59
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
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tayifeita: 金币+1 2014-01-06 17:01:29
有的质粒就只有一条带的
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2楼2014-01-05 16:52:47
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tayifeita

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不叶珏 at 2014-01-05 16:52:47
有的质粒就只有一条带的

我提的质粒一般都是10kb以下，碱裂解法提的话之后跑电泳一般都是两条带，一条超螺旋，一条有缺刻的环状。不知道你说的一条怎解？

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6楼2014-01-06 13:22:35
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tayifeita

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyugutou at 2014-01-05 17:27:46
提取的状态好是一条带，状态不好是三条带，另外你提的质粒RNA污染太多了。再有环状的质粒是不能用maker准确参考大小的，maker都是线性的。

一般用试剂盒提是一条带，目前我知道的用碱裂解法提的没有这样的现象。线性质粒在环状和超螺旋质粒之间，用marker是为了大概估算线性质粒大小，这次只提出一条带，所以很困惑是不是质粒大小的原因，另外我对质粒要求不高所以没有用rna酶处理。

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7楼2014-01-06 13:27:53
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tayifeita

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-05 20:02:59
可以放心用，如果是在不确定就做一个酶切，一切就明了了！

我也是这么想的，主要是以前没用碱裂解法提过10kb以上的质粒，不知道大质粒提取用什么方法比较好。

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8楼2014-01-06 13:30:40
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by tayifeita at 2014-01-06 13:22:35
我提的质粒一般都是10kb以下，碱裂解法提的话之后跑电泳一般都是两条带，一条超螺旋，一条有缺刻的环状。不知道你说的一条怎解？
...

具体我也不清楚 做了这么多种质粒 有的质粒就是只有一条带 有的就两条带分的很开 有的三条带
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9楼2014-01-06 22:07:13
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tayifeita at 2014-01-06 13:22:35
我提的质粒一般都是10kb以下，碱裂解法提的话之后跑电泳一般都是两条带，一条超螺旋，一条有缺刻的环状。不知道你说的一条怎解？
...

具体我也不清楚 做了这么多种质粒 有的质粒就是只有一条带 有的就两条带分的很开 有的三条带
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10楼2014-01-06 22:07:22
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慕亦凝

荣誉版主 (著名写手)
我也做过，用的是试剂盒
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11楼2014-04-20 15:14:24
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寒蝉凄切12324楼
2014-01-05 17:44   回复  
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