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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
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kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了已有1人参与

各位大虫，小弟最近扩增质粒，出现了怪现象，我的质粒转化的DH5a，挑取单克隆，再摇菌，提取质粒，跑胶发现质粒有很多条带，四条或者五条，就算是有超螺旋的和线性的，算起来也只有三条，不可能有四五条啊。我用BamH1 酶切（只有一个酶切位点），发现只有一条带。用EcoR1 酶切（只有一个酶切位点），也是一条带，用Sal 1 酶切（该质粒中无此酶酶切位点），发现切不开，条带和跑质粒一样。如果污染了其他质粒的话，用三种酶至少应该有个酶能切开污染的质粒吧，但都没发现杂带。如果没有污染其他质粒的话，质粒跑出来最多也是三条带啊，我这怎么出现了四五条。纠结啊…………，请各位给指点一二！
图片中 P：质粒，大约5000bp。
       Bam：BamH1酶切质粒
       Sal:    Sal1 酶切质粒
       Eco：EcoR1酶切的质粒
两个方框是单独挑取的两个菌落分别提的质粒。最左边和中间的是Marker5000。

0.8%Agarose
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1楼2012-04-10 11:27:53
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-10 18:37:35

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)

kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)

小婧子zj

金虫 (小有名气)
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