第一章 DNA提取与纯化

主题1：特殊组织DNA的提取及鉴定
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主题2：细菌基因组DNA的提取方法综述
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主题3：植物总DNA的提取方法
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主题4：DNA提取方法 影响提取质量的因素 提高提取质量的方法
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主题5：种子DNA提取方法
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主题6：对一些DNA提取方法的总结
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主题7：动物总DNA提取
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主题8：真菌DNA的提取
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主题9：DNA电泳常见问题分析
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主题10：SDS法：植物DNA的小量提取
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主题11：DNA提取方法
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主题12：动物肝脏DNA的提取
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主题13：细菌染色体DNA的大量提取与纯化
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主题14：石蜡包埋组织的DNA提取及其应用
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主题15：血液样本DNA的提取
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第二章 RNA提取与纯化

主题1：RNA抽提细节技巧小总结
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主题2：RNA抽提指南
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主题3：提取悬浮细胞RNA
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主题4：病毒RNA提取实验方法
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主题5：RNA操作中的一般要求
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主题6：RNA提取实验方法流程
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主题7：RNA操作注意事项与实验技巧
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主题8：mRNA的制备
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主题9：mRNA提取、分离纯化
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主题10：RNA抽提中自备有机溶液的配制及保存问题
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主题11：植物组织RNA提取的难点及对策
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主题12：总RNA的非变性电泳检测
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主题16：RNA抽提的技术及注意问题
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主题17：RNA提取及常见问题分析
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主题20：从RNA抽提到电泳鉴定
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主题21：植物RNA提取过程中多糖干扰的对策
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主题24：RNA的提取和cDNA合成原理和实验方法
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主题26：mRNA抽提操作手册
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主题28：RNA抽提技术及注意事项
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第三章 质粒提取与纯化
主题1：质粒DNA的分离纯化和鉴定
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发帖人：okaysee  

主题2：一步法提取质粒DNA
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发帖人：aronxu  

主题3：质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳
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发帖人：raoqun20  

主题4：质粒DNA提取试验常见问题解答
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发帖人：beingking  

主题5：质粒DNA的分离、纯化和鉴定
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发帖人：lgj7966

主题6：转一篇关于质粒DNA提取原理的很棒的文章
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发帖人：wjswj  

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主题7：质粒DNA的提取及浓度检测
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主题8：质粒快速提取试剂盒
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发帖人：applepie119
  
主题9：质粒DNA的提取和纯化
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发帖人：pzhangyh  

主题10：质粒提取简介及问题分析
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发帖人：yangym1123

第四章 综合篇
主题1：核酸抽提（最糟糕篇）
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发帖人：badger

主题2：核酸抽提原理
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发帖人： 静水深流106

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主题3：核酸提取及常见问题分析
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发帖人：BEFOREBEYOND  

主题4：DNA和RNA提取常见问题分析对策
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发帖人：czl-ee  

主题5：关于真菌的DNA和RNA提取方法的总结
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发帖人：haixianggao  

主题6：核酸提取常见问题分析
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=150148&fpage=275
发帖人：okaysee

主题7：核酸抽提
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发帖人：applepie119

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第一章 DNA提取与纯化

主题1：蚌的基因组DNA提取问题（拖尾严重）
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=888918&fpage=14
解答1：xyklmu  
拖尾严重一般认为是所得的DNA有蛋白的污染，蛋白未抽提完全。
分子量大小小于1万bps，主要是酚氯仿抽提造成剪切所致。要想获得大分子量的genomic DNA，可以在蛋白酶K充分消化后，直接用异丙醇沉淀即可，不必经过酚氯仿抽提的步骤。这也得看你抽提DNA以后，用于什么目的了。如果仅仅是做pcr之类的，不必酚氯仿抽提。

主题2：DNA上样缓冲液各组分作用，原理
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=893542&fpage=15
解答1： 三磷酸腺苷  
一般loadind buffer中的甘油、蔗糖都是辅助样品沉降的
因为样品太轻，在缓冲液中容易飘起来
所以需要一些重的东西包裹住，然后沉降下去
解答2：yujie8586  
DNA用的6xloading buffer 含有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)，可以观察电泳的进行情况。溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同（在0.5×TBE中)，而二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。溴酚蓝与二甲苯腈蓝FF在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率则随凝胶浓度的改变而不同。还有EDTA 和蔗醣。
解答3：xyklmu  
EDTA是DNAase的抑制剂，可以避免在电泳过程中DNAase的作用。

主题3：植物标本DNA提取，样品保鲜
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=882330&fpage=19

解答1：xueqiao1868  
新鲜的最好,降解少!
怎么才能防止变焉???注意保水
采集时用冰袋,尽快提取
解答2：wyzl2007  
最好的办法是将植物放入衣袋液氮罐中保存，只有有液氮就行
解答3：glenn_007  
我的样品是采下来新鲜的叶片，用蒸馏水和乙醇擦拭表面清洁后，放入变色硅胶中快速干燥的。提取的效果挺好的。
或者用书压着效果也可以。
只要表面没有发黄，没有真菌和虫蛀，提取就没问题
解答4：xujian568  
标本DNA的提取确实比较麻烦的，特别是老的标本，时间长了有时候就没有了，降解了，试试运气了，最好是用试剂盒。
保水的方法一般就是减少叶片的蒸腾，还有增加环境的湿度。
尽快提取。
解答5：ahhflhz  
采集回来放-８０度冰箱保存就行了，没有超低温冰箱就放在-２０度冰箱，
采叶片的时候放在冰盒里或者液氮里就可以了

主题4：酒精浸泡的昆虫标本DNA 提取
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=884772&fpage=19
解答1：bioplant  
乙醇具有沉淀DNA的作用，会不会提取时，沉淀的DNA在第一次裂解离心时丢弃啦。
常规试剂盒也是用普通试剂，所以有时自己配制的试剂因为新鲜，提取效果更好。

解答2： 三磷酸腺苷  
估计是乙醇没有挥发干就拿去提
核酸纯化做得很好的公司是QIAGEN，要不你联系他们的技术支持看看有没有合适的试剂盒

主题5：DNA电泳(在100bp处有很宽，很亮的一堆东西，这是什么啊)
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=901836&fpage=1

解答1：11014612
是RNA
解答2：helenfang  
在DNA提取过程中RNA很容易被降解，所以我想下面那些应该是降解的RNA碎片吧
解答3：snzydong  
破碎的DNA片段

解答4：yelitao1983
我想应该是RNA而不是DNA破碎的小片段！本人提过N次植物基因组了！如果提取过程中DNA断裂的话，应该是一长串弥散的带，不应该只在100bp处有带！如果你非要弄明白是不是RNA，向提出的基因组DNA中加RNA酶再泡电泳验证一下就可以了！

解答5：xiaochong0101  （楼主）
证实应该是RNA，因为加了RNA酶之后明显减少了

第一章 DNA提取与纯化
主题6：酵母总DNA提取
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=908616&fpage=3
解答1：三磷酸腺苷  
qiagen的核酸提取试剂盒一向都很好用
价格也不贵
解答2：aiai3252891  
第一种方法，如果你扩增的片段不是很长的话，你可试试将培养的菌放入沸水中煮沸，然后离心。此方法的缺点是容易将总基因组切断，但是很方便。
二、用酶去细胞壁，然后用SDS,EDTA,乙醇抽提，这种方法非常经典，但是操作比较繁琐，但是提取的基因组非常纯净，而且条件温和，不易破坏基因组

主题7：生物活性炭中提取DNA
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=906449&fpage=4
解答1： 三磷酸腺苷
用PBS充分清洗样品，后高速离心（8000~10000rpm左右）把泥土和细胞一起离下去，弃上清，这一步是去掉细胞外的可溶性杂质。
用PBS重悬，然后低速离心把泥土离到管底，但不至于把细胞离下去，这个转速你就好好摸一下就可以了。离过头了就重新震荡混匀，降低转速再试试。然后取上清。
上清里头就含有细胞了，这时候就用经典的酚抽提法提DNA了

主题8：请教影响DNA降解的因素
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=310068&fpage=350
解答1：zhyl1984  
酶，和DNA反复冻融
解答2：zw771113  
刚提取出来的DNA用TE 溶解时间过长会不会使DNA降解?
不会，TE是金属离子鳌合剂，而核酸酶一般需要有金属离子存在才有活性。所以用TE溶解几个小时DNA都不会降解。 建议你冻存的时候分装保存，用的时候拿一份。就可以避免反复冻溶造成 DNA降解。

主题9：DNA电泳图分析
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=444161&fpage=277
解答1：ldxmhyq  
曝光过度了吧。点样孔中有可能是没跑出来的样品，染色染的不好
解答2：xwluo  
点样孔太亮,可能是蛋白未去得干净,你用酚、氯仿、异戊醇多抽提几次就可以了
解答3：michaelwuqingyu  
蛋白没有去干净，蛋白带正电荷和核酸结合，导致ＤＮＡ在胶孔这跑不出去
解答4：phyllislhy  
点样孔里的是蛋白质，RNA提的倒是不错建议你用CTAB法试一下，可能蛋白或糖等杂质比较多，没有提出来。
解答5：vivalk  
可能是此生代谢产物较多，建议用经典的CTAB用尽量嫩的部位提取
解答6：天外飞天  
RNA没除去,用RNAase消化一下

主题10：电泳图分析（条带不清晰）
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=454851&fpage=275
解答1：Doublel  
电泳时电压过高会导致电流强度增加，而电流的热效应是和电流的平方成正比的，电流强度过高会直接导致凝胶发热。凝胶发热使DNA分子热运动加剧，扩散速度加快，从而导致条带不清晰。
解答2：levixzhu  
1 由于DNA分子量很大，一般建议用0.5-0.8%胶来电泳。PCR产物基本上可以根据分子量来决定胶浓度，一般用1-1.5%的胶浓度。所以建议，你用两块胶分别来跑DNA和PCR产物。
2 电泳电压对band的清晰度和分辨率是由影响的，电压的大小取决于你用的电泳槽正负极间的距离，一般是3-5V/cm。电压过高或过低，对band的清晰度和分辨率都是有影响的。
3 loading buffer的加量，要取决于你用的是几乘的loading buffer，如果是6Xloading buffer，loading buffer的量为你点样量的1/6，那么如果你点样5-6ul，加1ul loading buffer是可以的。如果用的是10Xloading buffer，loading buffer的量为你点样量的1/10，即如果你点样5ul，加0.5ul loading buffer就可以了。但是一般情况下，loading buffer量的多少对于条带的清晰与美观并无太大关系。
4 我们lab用的也是BIO-RAD的凝胶成像系统，说实话，你的条带是不太清晰。
建议A你用制胶的梳子时选择梳子空扁长的，那么条带会好看些。胶浓度也要相应调整。
B因为你的MARKER也不大漂亮，建议电压要优化些，电泳时间要视溴酚兰位于凝胶2/3位置时，可以停止电压。
C 还有你的电泳缓冲液，无论是TBE或是TAE，建议你换新的来电泳。一步步排除问题

第一章 DNA提取与纯化
主题11：土样中DNA的提取
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=156607&fpage=271
解答1：annpc5  
附件1：DNA recovery from soils of diverse composition
附件2：直接从土壤中提取DNA得方法

主题12：提取DNA时，PVP聚乙烯基吡咯烷酮的作用?
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=479437&fpage=258
解答1：发如雪
聚乙烯吡咯烷酮
分子式：(C6H9NO)n
一、性质：
　　粉末或水溶液，易溶于水及多种有机溶剂，具有良好溶解性，生物相溶性，生理惰性，成膜性，胶体保护能力和与多种有机、无机化合物复合的能力，对酸、盐及热较稳定。
二、用途：
　　在化妆品工业中作为分散剂、成膜剂、增稠剂、润滑剂及粘合剂，在医药工业中是药用合成新辅料之一，可用作片剂、颗粒的粘结剂、缓释剂。注射剂的助剂和稳定剂、胶囊的助流剂，液体制剂及着色剂的分散剂，酶及热敏药物的稳定剂，难溶药物的共沉淀剂，眼药的延效剂及润滑剂和包衣成膜剂等；在涂料、颜料、塑料树脂、玻璃纤维、油墨、粘合剂、净洗剂、摄影胶卷、压片、电视显像管、生产药水、胶布、消毒剂、纸张、纺织印染等方面用 作助剂。
解答2：anlewo7777  
PVP可与多种物质，特别是含羟基、羧基、氨基及其他含活性氢的化合物或单质形成络合物，例如，它可与许多毒素、病毒、医药及毒性化学品形成络合物，以减少其毒性和刺激性。
与少数几种物质（如多元酚）的络合力很强，在中性及酸性物质中，形成沉淀。这种特性可从溶液和饮料中除去多元酚和花色素氰。但使用不溶性 PVP效果更好。
解答3：分子进化  
主要是除多酚类物质

主题13：桃的DNA提取（果冻样沉淀）
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=488559&fpage=253
解答1：lyl0807  
加NaAc试试
解答2：tiny20022005  
先用无CTAB的缓冲液洗涤匀浆能较好去除多糖
解答3：randomqd  
把离心的速度调高些
解答4：hallhowe  
离心后去掉异丙醇，再加入乙醇沉淀，再离心。离心要高速，4度
解答5：Doublel  
杂质应该是树胶类物质，桃的果实中含量很多的。

主题14：请问怎样去除DNA提取产物中的色素等物质？
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=499180&fpage=250
解答1：cdl007  
你提的是DNA，可以用玻璃棒挑出来再溶到另一个管里
多漂洗几次，应该能去掉很多杂质
这个方法最简单而且不用引入新的污染
还可以采用非可溶性PVP（polyvinylpyrrolidone）研磨样品， PVP能络合多酚类物质，不但能较彻底防止氧化作用，而且能有效的去除多糖和色素，色素是PCR反应中的强抑制剂，一定要除掉

主题15：提取一种微型动物DNA
链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=538532&fpage=223
解答1：xiaopu_yin  
估计一些常规的方法你都试过，有没有想过在溶液中加几丁质酶，消化一部分虫体壁？
解答2：glucidum  
如果LZ只是需要提取一点点DNA 来做PCR,进行系统分析的话.建议试试在解剖镜下直接用镊子碾碎虫体然后加入蛋白酶消化处理。消化处理的溶液即可直接用做PCR,不需要再做沉淀处理等等。
解答3：陈硕真  
超声破碎或高速球磨等机械方法肯定能够破碎，用研磨也可以
解答4：dajiahaoma  
Evaluation of extraction methods  for the isolation of dust mites
7种提取方法 （附件下载）