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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提取一种微型动物DNA，怎么也提不出来，帮忙出出主意
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linkfuture

[交流] 提取一种微型动物DNA，怎么也提不出来，帮忙出出主意

大家可能都知道能寄生在人脸上的螨虫（蠕形螨科），
我现在的实验对象就是螨虫，不过和寄生在人身上的螨不属于同一科，其成虫体壁很厚，包含蜡质层　几丁质　＝＝，体长仅有０.４mm左右，十分小，

关键是组织破碎，释放DNA，但因为体形太小，一直找不到合适的方法，
各位虫侠给点意见　谢了先
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1楼 2007-07-30 19:02:48
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xiaopu_yin

金虫 (小有名气)
估计一些常规的方法你都试过，有没有想过在溶液中加几丁质酶，消化一部分虫体壁？
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2楼2007-07-31 06:40:31
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glucidum

金虫 (正式写手)
如果LZ只是需要提取一点点DNA 来做PCR,进行系统分析的话.建议试试在解剖镜下直接用镊子碾碎虫体然后加入蛋白酶消化处理。消化处理的溶液即可直接用做PCR,不需要再做沉淀处理等等。
具体方法LZ可以参考果蝇系统分析研究中DNA处理方法,只是要多一步机械破碎吧
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3楼2007-07-31 09:48:13
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陈硕真

超声破碎或高速球磨等机械方法肯定能够破碎，用研磨也可以，剩下的就听3楼的吧，开始我也没有想到PCR扩增，总是不做这方面的事，生疏了。
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4楼2007-07-31 10:25:01
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linkfuture

估计一些常规的方法你都试过，有没有想过在溶液中加几丁质酶，消化一部分虫体壁？
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回复2楼;想过了，一直想买,买不到,好象这种酶不常用,

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如果LZ只是需要提取一点点DNA 来做PCR,进行系统分析的话.建议试试在解剖镜下直接用镊子碾碎虫体然后加入蛋白酶消化处理。消化处理的溶液即可直接用做PCR,不需要再做沉淀处理等等。
具体方法LZ可以参考果蝇系统分析研究中DNA处理方法,只是要多一步机械破碎吧
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回复3楼::我都用昆虫针刺破了,但在转移到离心管中可能损失很多,所以没有保证,偶尔能提出来,而且太费时了

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超声破碎或高速球磨等机械方法肯定能够破碎，用研磨也可以，剩下的就听3楼的吧，开始我也没有想到PCR扩增，总是不做这方面的事，生疏了。
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回复4楼:超声破碎或高速球磨等机械 实验条件差,没这些仪器......

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最后感谢三位虫友的回复
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5楼2007-07-31 20:33:07
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dajiahaoma

木虫 (正式写手)
Evaluation of extraction methods  for the isolation of dust mites
7种提取方法
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6楼2007-08-01 08:42:39
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linkfuture

引用回帖:
Originally posted by dajiahaoma at 2007-8-1 08:42 AM:
Evaluation of extraction methods  for the isolation of dust mites
7种提取方法

多谢,敢问你也是做螨类方向的吗?
看了下,该文最终的结论是用the Epicentre
SoilMasterTM DNA Extraction Kit得到的DNA纯度最高,用kit对我门这里来说几乎是不大可能的,经费很有限,所以我还是考虑一些常规的提取方法

[ Last edited by linkfuture on 2007-8-1 at 16:55 ]
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7楼2007-08-01 16:04:03
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