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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问怎样去除DNA提取产物中的色素等物质？
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youyou1013

[交流] 请问怎样去除DNA提取产物中的色素等物质？

各位论坛的朋友们，你们好！
我有几个堆肥土壤样品，在用它们进行DNA提取（采用的方法是蛋白酶K-CTAB联合提取）的时候，发现整个上清液一直颜色呈很深的褐色，用氯仿-异戊醇后颜色还是不减。我再用异丙醇和PEG8000进行两次纯化，得到的DNA溶液颜色还是很深。PCR根本进行不下去！

我觉得可能是我的土壤样品含有太多杂质，导致色素等物质过多，请教各位论坛的朋友，有没有很好的去除这些色素的办法呢？

敬请各位赐教！
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1楼 2007-06-11 15:54:09
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cdl007

木虫 (正式写手)
你提的是DNA，可以用玻璃棒挑出来再溶到另一个管里
多漂洗几次，应该能去掉很多杂质
这个方法最简单而且不用引入新的污染

还可以采用非可溶性PVP（polyvinylpyrrolidone）研磨样品， PVP能络合多酚类物质，不但能较彻底防止氧化作用，而且能有效的去除多糖和色素，

色素是PCR反应中的强抑制剂，一定要除掉

[ Last edited by cdl007 on 2007-6-11 at 16:21 ]
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2楼2007-06-11 16:15:37
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youyou1013

嗯！谢谢这位朋友，我用你刚刚说的两种方法试试实验效果的！

另外就是，我用十分之一10%的CTAB/0.7NaCl以及三分之一体积的氯仿沉淀，离心后基本上上清液基本呈无色，再用无水乙醇沉淀过夜，获得的DNA基本没有了！

这种方法对DNA损失很大吗？但是我也看过其他很多人有做过这样的实验啊。
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3楼2007-06-11 16:36:23
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