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汕头大学海洋科学接受调剂
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youyou1013

[交流] 请问怎样去除DNA提取产物中的色素等物质?

各位论坛的朋友们,你们好!
我有几个堆肥土壤样品,在用它们进行DNA提取(采用的方法是蛋白酶K-CTAB联合提取)的时候,发现整个上清液一直颜色呈很深的褐色,用氯仿-异戊醇后颜色还是不减。我再用异丙醇和PEG8000进行两次纯化,得到的DNA溶液颜色还是很深。PCR根本进行不下去!

我觉得可能是我的土壤样品含有太多杂质,导致色素等物质过多,请教各位论坛的朋友,有没有很好的去除这些色素的办法呢?

敬请各位赐教!
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cdl007

木虫 (正式写手)

你提的是DNA,可以用玻璃棒挑出来再溶到另一个管里
多漂洗几次,应该能去掉很多杂质
这个方法最简单而且不用引入新的污染

还可以采用非可溶性PVP(polyvinylpyrrolidone)研磨样品, PVP能络合多酚类物质,不但能较彻底防止氧化作用,而且能有效的去除多糖和色素,

色素是PCR反应中的强抑制剂,一定要除掉

[ Last edited by cdl007 on 2007-6-11 at 16:21 ]
2楼2007-06-11 16:15:37
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youyou1013

嗯!谢谢这位朋友,我用你刚刚说的两种方法试试实验效果的!

另外就是,我用十分之一10%的CTAB/0.7NaCl以及三分之一体积的氯仿沉淀,离心后基本上上清液基本呈无色,再用无水乙醇沉淀过夜,获得的DNA基本没有了!

这种方法对DNA损失很大吗?但是我也看过其他很多人有做过这样的实验啊。
3楼2007-06-11 16:36:23
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