| 查看: 1944 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
RNA 操作注意事项与实验技巧
|
|||
|
我这里有一点RNA 操作注意事项与实验技巧的资料，与大家共分享 RNA 操作注意事项与实验技巧 操作注意事项： 由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。 归根究底，RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不当操作都有可能造成RNA酶污染，从而导致整个实验失败。因此，严格控制实验条件，避免任何可能的污染是保证实验成功的关键，必须做到以下几点： 1.如果可能，实验室应辟出专门RNA操作区，离心机、移液枪、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁，并定期进行消毒。 2.操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套，并经常更换，以避免将手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带入试管或污染用具。尽量避免使用抛弃式塑料手套。塑料手套不贴身，常常造成操作不便，而且多出部分还容易在器具上遭RNA酶污染并向未污染处传递，扩大污染。 3.尽量使用一次性枪头、离心管等塑料制品，尽量避免与其它实验共享器具，以防止交叉污染。推荐使用出厂前已经灭菌的枪头和离心管，大多国外厂商供应的无菌塑料制品很少有RNA酶污染，买来后可直接用于RNA操作。许多研究者用DEPC等处理的塑料制品，往往由于二次污染而带有RNA酶，从而导致实验失败。 4.配制溶液用的酒精，异丙醇、Tris等应采用未开封的新品。溶液需用DEPC水配制（加0.01%(体积比)DEPC至重蒸水或Mili Q级水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水）。 5.所有玻璃制品都必须在240℃烘烤4小时。所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟，并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌，也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。无法用DEPC处理的用具可以用氯仿擦拭若干次，这样通常可以消除RNA酶的活性。 样本保存的注意事项： 样本一旦从生物体中分离后，细胞内的RNA就变得非常不稳定，容易降解。因此取样后，如何保证取样前后基因的表达模式不变，就变得非常重要。传统方法是用液氮速冻，再放到超低温冰箱中保存。 目前有些厂家开发出专门的RNA保护剂，如Qiagen公司的RNAlater是具有抑制RNase和稳定RNA作用的试剂，将采集的组织样本等直接放入到RNAlater中，即可起到稳定样本中RNA的作用。无需液氮或干冰，方便安全地在室温下保存一段时间，低温可长期保存。还有对细菌样本专用的RNAprotect Bacteria Reagent及对血液样本专用的PAXgene™ Blood RNA System。 RNA的定量与纯度： RNA通常用分光光度计定量，测量在260 nm处的吸收值（A260）。通常分光光度计A260的读数要介于0.15-1.0之间才是可靠的，因此RNA提取结束后，要根据大概产量稀释（推荐用10 mM Tris.HCl, pH 7.0稀释）到适当浓度范围，再用分光光度计测量。A260为1相当于RNA的浓度为40 µg/ml。 为了检测RNA的纯度，可以测量A260与A280的比值，通常纯RNA的A260/A280为1.9-2.1。 |
回复此楼» 猜你喜欢
290调剂生物0860
已经有16人回复
-
材料与化工300求调剂
已经有39人回复
-
求调剂
已经有19人回复
-
材料工程日语考生求调剂
已经有6人回复
-
调剂求收留
已经有21人回复
-
求调剂，985材料与化工348分
已经有6人回复
-
266求调剂，一志愿哈工程电子信息，本科获多项国奖和省奖
已经有8人回复
-
271求调剂
已经有19人回复
-
270求调剂
已经有11人回复
-
材料工程281还有调剂机会吗
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
zhzliang
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1394.2
- 帖子: 108
- 在线: 12.3小时
- 虫号: 130735
- 注册: 2005-12-12
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
2楼2006-01-04 22:43:45
，刚刚做完RNA方面的，应该早一点看 3楼2006-01-05 18:49:05
4楼2006-01-06 19:02:18
我是醒目
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 5718.4
- 散金: 137
- 红花: 3
- 帖子: 2671
- 在线: 142.4小时
- 虫号: 115809
- 注册: 2005-11-24
- 专业: 职业技术教育学
5楼2006-01-06 21:32:57
0.5
 |
6楼2006-01-09 14:42:04
7楼2006-07-25 22:59:55
0.5
| 谢谢分享！！！ |
8楼2006-08-03 08:53:10
9楼2006-08-11 15:23:19
10楼2006-08-12 00:40:14
