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maii

铁虫 (小有名气)

[交流] DNA提取

最近在帮别人提桃的DNA,可是我试了几乎所有ctab提取DNA的方法,都不凑效。现在的问题是用异丙醇沉淀DNA时,可见白色沉淀,但下一步用乙醇沉淀时,就成了果冻!我就用除多糖的方法去消除,可是根本不管用。有那位大侠做过相关的工作,指点一下迷津。谢谢了!

原来在提DNA时的问题解决了,现在又遇到了新的问题。
我提的是桃的DNA,走的路线是用提取缓冲液先除一下细胞间的杂质,后用CTAB裂解,再后是加氯仿-异戊醇,苯酚-氯仿-异戊醇,氯仿-异戊醇,再加1/10体积的NaAc,二倍体积的无水乙醇,得到沉淀,再用70%乙醇洗,到这都好着呢,在消化DNA时用的是氯仿-异戊醇,1/10体积的NaAc,二倍体积的无水乙醇,可到了这儿就又有点像果冻了,跑电泳显示有杂质,不知该怎么办?
我用的离心速度都是12000rpm,5min.

[ Last edited by maii on 2007-6-4 at 08:35 ]
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lyl0807

金虫 (正式写手)

加NaAc试试
多糖是用什么方法除去的?
QQ:124896607
hello!
2楼2007-05-30 15:42:55
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tiny20022005


whxhxq(金币+1):thank you!
先用无CTAB的缓冲液洗涤匀浆能较好去除多糖,不知有没试过?现在较多文献都参考这个方法。
3楼2007-05-30 17:51:07
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sunlei20068888

新虫 (初入文坛)

用试剂盒试试啊
4楼2007-05-30 21:32:31
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sunlei20068888

新虫 (初入文坛)

用试剂盒试试啊
5楼2007-05-30 21:33:16
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huang1962

银虫 (小有名气)

请先告诉我们DNA的来源是啥
6楼2007-05-30 22:06:25
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

把离心的速度调高些

把离心的速度调高些
未来天空才是极限
7楼2007-05-30 22:20:27
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hallhowe

木虫 (正式写手)

建议使用好的试剂盒和提高离心速度

离心后去掉异丙醇,再加入乙醇沉淀,再离心。离心要高速,4度
8楼2007-05-30 22:35:29
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maii

铁虫 (小有名气)

plantsoil(金币+0):请将此内容编辑到一楼,便于其他人看到,原内容建议保留。同时注意版规http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=488080
谢谢各位虫友的回答。原来在提DNA时的问题解决了,现在又遇到了新的问题。
我提的是桃的DNA,走的路线是用提取缓冲液先除一下细胞间的杂质,后用CTAB裂解,再后是加氯仿-异戊醇,苯酚-氯仿-异戊醇,氯仿-异戊醇,再加1/10体积的NaAc,二倍体积的无水乙醇,得到沉淀,再用70%乙醇洗,到这都好着呢,在消化DNA时用的是氯仿-异戊醇,1/10体积的NaAc,二倍体积的无水乙醇,可到了这儿就又有点像果冻了,跑电泳显示有杂质,不知该怎么办?
我用的离心速度都是12000rpm,5min.

[ Last edited by maii on 2007-6-3 at 13:32 ]
9楼2007-06-03 13:30:07
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Doublel

铁虫 (小有名气)

杂质应该是树胶类物质,桃的果实中含量很多的。
10楼2007-06-03 19:17:03
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