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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA提取
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maii

铁虫 (小有名气)

[交流] DNA提取

最近在帮别人提桃的DNA，可是我试了几乎所有ctab提取DNA的方法，都不凑效。现在的问题是用异丙醇沉淀DNA时，可见白色沉淀，但下一步用乙醇沉淀时，就成了果冻！我就用除多糖的方法去消除，可是根本不管用。有那位大侠做过相关的工作，指点一下迷津。谢谢了！

原来在提DNA时的问题解决了，现在又遇到了新的问题。
我提的是桃的DNA，走的路线是用提取缓冲液先除一下细胞间的杂质，后用CTAB裂解，再后是加氯仿-异戊醇，苯酚-氯仿-异戊醇，氯仿-异戊醇，再加1/10体积的NaAc，二倍体积的无水乙醇，得到沉淀，再用70%乙醇洗，到这都好着呢，在消化DNA时用的是氯仿-异戊醇，1/10体积的NaAc，二倍体积的无水乙醇，可到了这儿就又有点像果冻了，跑电泳显示有杂质，不知该怎么办？
我用的离心速度都是12000rpm,5min.

[ Last edited by maii on 2007-6-4 at 08:35 ]
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1楼 2007-05-30 09:25:56
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lyl0807

金虫 (正式写手)
加NaAc试试
多糖是用什么方法除去的?
QQ:124896607
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hello!
2楼2007-05-30 15:42:55
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tiny20022005

★
whxhxq(金币+1):thank you!
先用无CTAB的缓冲液洗涤匀浆能较好去除多糖，不知有没试过？现在较多文献都参考这个方法。
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3楼2007-05-30 17:51:07
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sunlei20068888

新虫 (初入文坛)
用试剂盒试试啊
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4楼2007-05-30 21:32:31
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sunlei20068888

新虫 (初入文坛)
用试剂盒试试啊
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5楼2007-05-30 21:33:16
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huang1962

银虫 (小有名气)
请先告诉我们DNA的来源是啥
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6楼2007-05-30 22:06:25
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

把离心的速度调高些

把离心的速度调高些
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未来天空才是极限
7楼2007-05-30 22:20:27
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hallhowe

木虫 (正式写手)

建议使用好的试剂盒和提高离心速度

离心后去掉异丙醇，再加入乙醇沉淀，再离心。离心要高速，4度
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8楼2007-05-30 22:35:29
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maii

铁虫 (小有名气)
plantsoil(金币+0):请将此内容编辑到一楼，便于其他人看到，原内容建议保留。同时注意版规http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=488080
谢谢各位虫友的回答。原来在提DNA时的问题解决了，现在又遇到了新的问题。
我提的是桃的DNA，走的路线是用提取缓冲液先除一下细胞间的杂质，后用CTAB裂解，再后是加氯仿-异戊醇，苯酚-氯仿-异戊醇，氯仿-异戊醇，再加1/10体积的NaAc，二倍体积的无水乙醇，得到沉淀，再用70%乙醇洗，到这都好着呢，在消化DNA时用的是氯仿-异戊醇，1/10体积的NaAc，二倍体积的无水乙醇，可到了这儿就又有点像果冻了，跑电泳显示有杂质，不知该怎么办？
我用的离心速度都是12000rpm,5min.

[ Last edited by maii on 2007-6-3 at 13:32 ]
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9楼2007-06-03 13:30:07
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Doublel

铁虫 (小有名气)
杂质应该是树胶类物质，桃的果实中含量很多的。
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10楼2007-06-03 19:17:03
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