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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 一步法提取质粒DNA
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aronxu

铁虫 (初入文坛)

[交流] 一步法提取质粒DNA

一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。

主要步骤如下：

    收集1.5mL菌体，彻底除去培养基；

    加入50ulSTE缓冲液重悬菌体；

    加入50ul酚：氯仿;异戊醇（25：24：1），混匀；

    12000rpm离心5分钟，取上清到另一离心管中；

    加入NH4Ac至终浓度2M，并加入2倍体积的乙醇，混匀，室温或冰上放置几分钟；

    12000rpm离心5分钟，弃上清，75%乙醇清沉淀；

    沉淀干后，以水或TE缓冲液溶解，便可进行酶切等操作。

这种方法提到的质粒中，也有部分基因组DNA，但不影响酶切检测鉴定，但是某些要求严格的实验不能采用这种方法。
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1楼 2006-03-10 02:07:13
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jinhx87

至尊木虫 (知名作家)

0.5

ding
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2楼2006-03-10 06:54:36
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蓝百百

0.5

very good
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3楼2006-03-10 09:01:19
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annie_lenny

金虫 (小有名气)

0.25

beautiful
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4楼2006-03-15 12:23:19
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