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xyz4718

木虫 (正式写手)

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[资源] 关于DNA提取----提取动物总DNA

1、取动物组织100mg左右于样品管中，用干净的剪刀将组织块剪碎。
2、在样品管中加入如下试剂：
500μl的STE溶液(0.1mol/L NaCl，10mmol/L pH=8.0的Tris·Cl，1mmol/L EDTA)
25 μl 蛋白酶 K（Proteinase K，10 mg／ml）
75μl 10％ SDS
3、混匀后置56℃下消化2小时以上（隔一定时间混匀一次）。
4、加人等体积的饱和酚溶液，轻轻颠倒混合5分钟以上，用于rDNA(核糖体DNA)和RAPD(rapid amplified polymorphic DNA)分析的样品需抽提24小时。
5、7000r／min 离心5分钟。
6、小心将上层清液移至另一干净的离心管中，加入等体积的苯酚及氯仿，并重复步骤4、5。
7、以等体积的氯仿（内含1／25 体积的异戊醇）重复步骤4、5和。
8、在上清液中加入1／10体积的3mol／dm３乙酸钠(NaAc)或 5mol／dm３乙酸铵(NH４Ac)、2 倍体积的-20度预冷的无水乙醇或1倍体积的异丙醇，以沉淀DNA。
9、-70℃下沉淀2小时或置-20℃下沉淀过夜。
10、7000r／min离心10分钟，再以-20度预冷的70％乙醇洗涤DNA沉淀一次，将沉淀置真空干燥器或37℃温箱中干燥。
11、以适量的TE溶液（200-500μl）溶解DNA样品。
12、用分光光度计在260nm处测定DNA的浓度，260／280nm的光密度比值应在1.8以上(否则提示可能有蛋白质或苯酚的污染)。
13、以TE(溶解DNA，10mmol/L Tris-HCl，1mmol/LpH=8.0的EDTA)溶液将DNA样品稀释成所需的工作液的浓度。
14、取2μl左右的样品进行电泳检测，以判断DNA是否有降解以及是否需要消除RNA。

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