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关于DNA提取----提取动物总DNA
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1、取动物组织100mg左右于样品管中，用干净的剪刀将组织块剪碎。 2、在样品管中加入如下试剂： 500μl的STE溶液(0.1mol/L NaCl，10mmol/L pH=8.0的Tris·Cl，1mmol/L EDTA) 25 μl 蛋白酶 K（Proteinase K，10 mg／ml） 75μl 10％ SDS 3、混匀后置56℃下消化2小时以上（隔一定时间混匀一次）。 4、加人等体积的饱和酚溶液，轻轻颠倒混合5分钟以上，用于rDNA(核糖体DNA)和RAPD(rapid amplified polymorphic DNA)分析的样品需抽提24小时。 5、7000r／min 离心5分钟。 6、小心将上层清液移至另一干净的离心管中，加入等体积的苯酚及氯仿，并重复步骤4、5。 7、以等体积的氯仿（内含1／25 体积的异戊醇）重复步骤4、5和。 8、在上清液中加入1／10体积的3mol／dm３乙酸钠(NaAc)或 5mol／dm３乙酸铵(NH４Ac)、2 倍体积的-20度预冷的无水乙醇或1倍体积的异丙醇，以沉淀DNA。 9、-70℃下沉淀2小时或置-20℃下沉淀过夜。 10、7000r／min离心10分钟，再以-20度预冷的70％乙醇洗涤DNA沉淀一次，将沉淀置真空干燥器或37℃温箱中干燥。 11、以适量的TE溶液（200-500μl）溶解DNA样品。 12、用分光光度计在260nm处测定DNA的浓度，260／280nm的光密度比值应在1.8以上(否则提示可能有蛋白质或苯酚的污染)。 13、以TE(溶解DNA，10mmol/L Tris-HCl，1mmol/LpH=8.0的EDTA)溶液将DNA样品稀释成所需的工作液的浓度。 14、取2μl左右的样品进行电泳检测，以判断DNA是否有降解以及是否需要消除RNA。 |
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