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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr扩增后 电泳后条带不对 请大侠帮忙!
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)

[求助] pcr扩增后 电泳后条带不对 请大侠帮忙! 已有3人参与

下面是我的电泳图   红框里是我的问题条带 基因原长是2900BP左右
PCR模板 是连了T载体的质粒
酶切是可以获得目的基因的 就是 红框后面的酶切条带
但是pCR得不到目的条带
我重新提取了野生型的DNA 也没有扩增出目的条带
我用的酶有primier start  普通TAQ也没有。。。
求解！！！！！！！！！！！！！！1

pcr扩增后 电泳后条带不对 请大侠帮忙!
2015.6.11 sdp37 sdp27 hmg pcr2.jpg


pcr扩增后 电泳后条带不对 请大侠帮忙!-1
2015.6.11 sdp37 sdp27 hmg pcr2.jpg
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1楼 2015-07-10 09:26:16
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hg30717580 at 2015-07-10 16:22:27
把你的模板质粒稀释下作为模板 再PCR扩增下试试看。

我稀释过 10 50 倍就没有带了
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10楼2015-07-13 11:42:21
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:06:29
你说的问题条带是什么意思？是你的目的条带吗？2900bp也不算长啊，引物模板退火温度都是要考虑的，质粒作为模板扩增也很常见，应该不会有问题吧（你自己看看）引物也得你自己验证了，，可以使用hot start taq酶扩增试试看，改用热启动PCR的方法，高保真酶可能会让模板降解吧
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-07-10 10:11:44
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-07-10 10:11:44
你说的问题条带是什么意思？是你的目的条带吗？2900bp也不算长啊，引物模板退火温度都是要考虑的，质粒作为模板扩增也很常见，应该不会有问题吧（你自己看看）引物也得你自己验证了，，可以使用hot start taq酶扩增 ...

我的问题是我做了PCR 但是条带看上去不是质粒吗 就像质粒自己跑的电泳 没有经过PCR
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3楼2015-07-10 10:52:45
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xianglixie3 at 2015-07-10 10:52:45
我的问题是我做了PCR 但是条带看上去不是质粒吗 就像质粒自己跑的电泳 没有经过PCR...

。。。什么 问题，我竟无言以对
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-07-10 10:54:44
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