[求助] pcr扩增后电泳后条带不对请大侠帮忙!已有3人参与

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1楼2015-07-10 09:26:16

xianglixie3

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2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-07-10 10:11:44
你说的问题条带是什么意思？是你的目的条带吗？2900bp也不算长啊，引物模板退火温度都是要考虑的，质粒作为模板扩增也很常见，应该不会有问题吧（你自己看看）引物也得你自己验证了，，可以使用hot start taq酶扩增 ...

我的问题是我做了PCR 但是条带看上去不是质粒吗就像质粒自己跑的电泳没有经过PCR

3楼2015-07-10 10:52:45

xianglixie3

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4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-07-10 10:54:44
。。。什么问题，我竟无言以对...

就是理论上来说我用红色框框框出来的带应该在 2900 但是事实上它不在
而且这个带看上起很大而且像是直接用质粒跑电泳出现的条带

5楼2015-07-10 11:54:54

xianglixie3

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6楼: Originally posted by hg30717580 at 2015-07-10 16:22:27
把你的模板质粒稀释下作为模板再PCR扩增下试试看。

我稀释过 10 50 倍就没有带了

10楼2015-07-13 11:42:21

xianglixie3

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7楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-07-10 17:00:24
楼主你想多了，那怎么可能是质粒直接跑的电泳，你设计引物是干嘛的，能跑出整个，那只是非特异性条带而已。。。。...

好的

11楼2015-07-13 11:42:52

xianglixie3

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8楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-07-10 23:11:05
楼主啊，问题我看了好久才看懂，下次上图的时候别把整张图都放上来。

据我分析，你质粒模板是加多了，引物还没经过三个循环就差不多用完了。仔细考虑下pcr前三个循环，相信你能懂的。

所以我稀释模板吗？

12楼2015-07-13 11:43:40