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small521

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达问题 已有1人参与

我有一个基因，这个基因全长约3.5kb，但是在利用软件分析时发现在1kb左右位置存在一个TAA终止子，然后后面也存在一个ATG，有部分重合，相当于这部分序列为TAATG，然后软件预测就把这个基因分为两个基因，但是其同源基因都是一个连续的基因，现在老板让表达这个蛋白，是应该把这个表达为融合蛋白呢还是单独表达呢，后面是要用该蛋白做活性互作的，如果表达融合蛋白是单纯的把TAA终止子去掉吗？还需要加什么linker什么的吗？
本人是新手，希望各位给予帮助，万分感谢
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1楼 2015-06-30 19:57:39
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要找到这个基因的最开始那个起始密码子，然后翻译，看看这个地方有没有问题，不能从序列中间找起始密码子。比如你的序列如果是xxTAATGxx，那翻译的时候就xxT AAT Gxx三个氨基酸，说不定就没有问题了。
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2楼2015-07-01 10:25:54
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small521

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2015-07-01 10:25:54
你要找到这个基因的最开始那个起始密码子，然后翻译，看看这个地方有没有问题，不能从序列中间找起始密码子。比如你的序列如果是xxTAATGxx，那翻译的时候就xxT AAT Gxx三个氨基酸，说不定就没有问题了。

是找了起始的密码子的，就是这个基因大概是ATG*********TAATG*****TAG这样的，然后用软件分析就把这整个基因给分成两个基因了，这是全基因组测序的结果，今天和老板讨论的时候忽然发现起始这个基因在原宿主里面如果是两个基因那么应该是共表达的，所以我俩都觉得不用单独表达了，直接应该能同时使用pet28的T7启动子一起表达，做做看
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3楼2015-07-01 11:41:03
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小_菜鸟

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by small521 at 2015-07-01 11:41:03
是找了起始的密码子的，就是这个基因大概是ATG*********TAATG*****TAG这样的，然后用软件分析就把这整个基因给分成两个基因了，这是全基因组测序的结果，今天和老板讨论的时候忽然发现起始这个基因在原宿主里面如果 ...

我觉得二楼说的对，翻译是三个密码子翻译成一个氨基酸，不能直接中间去找这些启动子、终止子。如果要验证，做了表达就知道了。
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4楼2015-07-01 22:55:28
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