| 查看: 2235 | 回复: 6 | |||
[求助]
原来表达目的蛋白的菌株现在怎么不表达了？
|
|
去年构建的重组蛋白脂肪酶，载体是pET28b，表达菌是BL21(DE3)诱导时O，D600为0.6左右加入IPTG，诱导4h和20h取样做SDS-PAGE电泳。去年表达时蛋白没有问题，今年重新构建了一个蛋白发现不表达，于是拿出去年的脂肪酶做正对照，发现正对照也表达不出蛋白了，自己分析原因如下： 1、菌体中载体丢失 菌体在Kan环境中能生长，排除了这种可能，下一步做一下菌落PCR进一步确定一下。 2、IPTG失效 开始用的是一年前配制好的，放在-20℃冰箱的，后来用粉末重新配的还是不行，我的粉末是到今年12月份过期，不知道是不是这个原因？ 3、所用其他试剂都是新配制的，而且应该也不会导致蛋白不表达吧，SDS-PAGE电泳所用试剂就是个载体，应该没什么影响吧？ 有哪位能帮忙分析一下或遇到这个问题，怎么解决的？先谢谢了 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 含有稀有密码子的基因想在大肠杆菌中做原核表达，Rosetta菌株
已经有11人回复
- 蛋白表达不出来，是什么原因造成的
已经有7人回复
- 原核表达做不出来了！
已经有15人回复
- 表达蛋白的菌株超声的问题
已经有3人回复
- 我的蛋白在大肠杆菌中表达量低怎么办？
已经有7人回复
- 蛋白表达不出来是怎么回事？
已经有12人回复
- 大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显
已经有5人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 目的蛋白序列连接pet15b测序结果正确为何不表达
已经有7人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 原核表达系统不表达目的蛋白
已经有8人回复
- 蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点……
已经有19人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 请教大肠杆菌中蛋白表达后该如何处理
已经有7人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？
已经有28人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
- 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
已经有9人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2013-11-14 23:04:51
jennifermatt
木虫 (小有名气)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 3377.4
- 散金: 21
- 红花: 2
- 帖子: 177
- 在线: 55.7小时
- 虫号: 2646711
- 注册: 2013-09-11
- 性别: MM
- 专业: 微生物学
3楼2013-11-15 10:57:00
4楼2013-11-15 11:08:22
5楼2013-11-15 11:09:18
6楼2013-11-21 08:40:28
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
7楼2013-11-21 12:36:58
