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原来表达目的蛋白的菌株现在怎么不表达了？
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去年构建的重组蛋白脂肪酶，载体是pET28b，表达菌是BL21(DE3)诱导时O，D600为0.6左右加入IPTG，诱导4h和20h取样做SDS-PAGE电泳。去年表达时蛋白没有问题，今年重新构建了一个蛋白发现不表达，于是拿出去年的脂肪酶做正对照，发现正对照也表达不出蛋白了，自己分析原因如下： 1、菌体中载体丢失 菌体在Kan环境中能生长，排除了这种可能，下一步做一下菌落PCR进一步确定一下。 2、IPTG失效 开始用的是一年前配制好的，放在-20℃冰箱的，后来用粉末重新配的还是不行，我的粉末是到今年12月份过期，不知道是不是这个原因？ 3、所用其他试剂都是新配制的，而且应该也不会导致蛋白不表达吧，SDS-PAGE电泳所用试剂就是个载体，应该没什么影响吧？ 有哪位能帮忙分析一下或遇到这个问题，怎么解决的？先谢谢了 |
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