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草本凝香

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 请教大肠杆菌中蛋白表达后该如何处理

请教各位：我的多肽在大肠杆菌中诱导表达后，离心收集菌体沉淀，我想问的是这个沉淀用什么试剂重悬？我现在用的是PBS（pH8.0），不知道行不行？
还有一个问题：菌体沉淀只加某种重悬试剂，再与loading buffer混旋，煮沸上样跑电泳就可以吗？需不需要再加入裂解液之类的，我总觉得细菌都没有被裂解，跑出来的电泳条带会是全菌蛋白吗？不吝赐教，谢谢各位了

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1楼2011-05-13 20:20:19

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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-05-13 20:51:16
草本凝香(金币+1): 非常感谢：）还想请问：您说的pH值行不行，主要看蛋白质的性质。您能说的具体点吗？我刚开始接触这些知识，有很多不懂的，请您不吝赐教，谢谢您 2011-05-14 16:18:40

引用回帖:

Originally posted by 草本凝香 at 2011-05-13 20:20:19:
请教各位：我的多肽在大肠杆菌中诱导表达后，离心收集菌体沉淀，我想问的是这个沉淀用什么试剂重悬？我现在用的是PBS（pH8.0），不知道行不行？
还有一个问题：菌体沉淀只加某种重悬试剂，再与loading buffer混旋 ...

根据我们实验室的经验，Tris-HCl和PBS pH8.0均可。这个pH值行不行，主要看你的蛋白质的性质。

另一个问题：可以用以上缓冲液重悬，跑出的电泳是全菌体电泳图谱，即菌体所有蛋白条带。其中煮沸环节可以破碎细胞。