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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌表达问题
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查看: 2014  |  回复: 19
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌表达问题 已有9人参与

如何让大肠杆菌中的目的蛋白在上清中表达？我的表达都在沉淀里，大家看看都有什么方法啊？
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平和悦衲！
1楼 2010-06-22 14:02:25
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换载体啊
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I am not a hero , but I served with heroes！
2楼2010-06-22 15:12:16
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接裂解不行么？
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3楼2010-06-22 16:34:53
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):是的，虽然表达量高，但是这个缺点也实在是让人有点头疼！ 2010-06-22 18:28:18
换载体是一方面；另外，高表达都会产生包涵体，这是大肠杆菌表达的一个缺点！
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梦在路就在！
4楼2010-06-22 16:47:56
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
怎么直接裂解啊？我的目的产物是酶
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平和悦衲！
5楼2010-06-22 16:48:30
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
引用回帖:
Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-06-22 16:47:56:
换载体是一方面；另外，高表达都会产生包涵体，这是大肠杆菌表达的一个缺点！

致命的缺点啊，要是有简单易行的包涵体复性方法，那么生物会有一个新天地！
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平和悦衲！
6楼2010-06-22 16:49:43
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是有很多公司买复性的试剂的，可以尝试一下，有时也是很有用的，或者可以自己配一配。
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梦在路就在！
7楼2010-06-22 16:53:24
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
1949stone:是的 我以前在公司里做过大规模复性 很复杂 2010-06-23 09:13:06
希望能有不复性的方法
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平和悦衲！
8楼2010-06-22 17:53:05
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流，希望对楼主有用~~ 2010-06-22 18:27:05
低温过夜诱导，诱导前必须把培养的菌体冷却，我都是给泡在冰水混合物中（一师姐的蛋白曾经包涵体表达，一次偶然把培养好的菌体放在4度了几个小时再诱导，上清表达！）；低浓度IPTG；在较低OD值时候诱导（见资料这么说过，自己没试过）
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9楼2010-06-22 18:14:17
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tz0004

银虫 (初入文坛)
换质粒太麻烦了，
低温培养让它生长的慢点这样包涵体可能就没有了
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10楼2010-06-22 18:41:51
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