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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌表达问题 已有9人参与

如何让大肠杆菌中的目的蛋白在上清中表达?我的表达都在沉淀里,大家看看都有什么方法啊?
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平和悦衲!
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

怎么直接裂解啊?我的目的产物是酶
平和悦衲!
5楼2010-06-22 16:48:30
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

引用回帖:
Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-06-22 16:47:56:
换载体是一方面;另外,高表达都会产生包涵体,这是大肠杆菌表达的一个缺点!

致命的缺点啊,要是有简单易行的包涵体复性方法,那么生物会有一个新天地!
平和悦衲!
6楼2010-06-22 16:49:43
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

1949stone:是的 我以前在公司里做过大规模复性 很复杂 2010-06-23 09:13:06
希望能有不复性的方法
平和悦衲!
8楼2010-06-22 17:53:05
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-22 18:14:17:
低温过夜诱导,诱导前必须把培养的菌体冷却,我都是给泡在冰水混合物中(一师姐的蛋白曾经包涵体表达,一次偶然把培养好的菌体放在4度了几个小时再诱导,上清表达!);低浓度IPTG;在较低OD值时候诱导(见资料这 ...

谢谢啊  低IPTG我试过了,低OD也试过了  没有效果啊 冷却菌体我还没有试过  试试看
平和悦衲!
11楼2010-06-23 09:09:21
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

好的,有没有什么特殊的质粒或是菌株啊?总得有点针对性吧
平和悦衲!
13楼2010-06-23 10:27:02
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-06-23 13:29:18:
恩,直接做真核的还好一些~

感谢啊,尝试换一下菌株吧,希望能有好结果!
平和悦衲!
18楼2010-06-24 08:32:25
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