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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌表达问题 已有9人参与

如何让大肠杆菌中的目的蛋白在上清中表达?我的表达都在沉淀里,大家看看都有什么方法啊?
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平和悦衲!
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
换载体啊
I am not a hero , but I served with heroes!
2楼2010-06-22 15:12:16
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
直接裂解不行么?
3楼2010-06-22 16:34:53
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):是的,虽然表达量高,但是这个缺点也实在是让人有点头疼! 2010-06-22 18:28:18
换载体是一方面;另外,高表达都会产生包涵体,这是大肠杆菌表达的一个缺点!
梦在路就在!
4楼2010-06-22 16:47:56
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

怎么直接裂解啊?我的目的产物是酶
平和悦衲!
5楼2010-06-22 16:48:30
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

引用回帖:
Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2010-06-22 16:47:56:
换载体是一方面;另外,高表达都会产生包涵体,这是大肠杆菌表达的一个缺点!

致命的缺点啊,要是有简单易行的包涵体复性方法,那么生物会有一个新天地!
平和悦衲!
6楼2010-06-22 16:49:43
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还是有很多公司买复性的试剂的,可以尝试一下,有时也是很有用的,或者可以自己配一配。
梦在路就在!
7楼2010-06-22 16:53:24
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

1949stone:是的 我以前在公司里做过大规模复性 很复杂 2010-06-23 09:13:06
希望能有不复性的方法
平和悦衲!
8楼2010-06-22 17:53:05
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流,希望对楼主有用~~ 2010-06-22 18:27:05
低温过夜诱导,诱导前必须把培养的菌体冷却,我都是给泡在冰水混合物中(一师姐的蛋白曾经包涵体表达,一次偶然把培养好的菌体放在4度了几个小时再诱导,上清表达!);低浓度IPTG;在较低OD值时候诱导(见资料这么说过,自己没试过)
9楼2010-06-22 18:14:17
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tz0004

银虫 (初入文坛)

换质粒太麻烦了,
低温培养让它生长的慢点这样包涵体可能就没有了
10楼2010-06-22 18:41:51
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