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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌表达问题 已有9人参与

如何让大肠杆菌中的目的蛋白在上清中表达?我的表达都在沉淀里,大家看看都有什么方法啊?
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平和悦衲!
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流,希望对楼主有用~~ 2010-06-22 18:27:05
低温过夜诱导,诱导前必须把培养的菌体冷却,我都是给泡在冰水混合物中(一师姐的蛋白曾经包涵体表达,一次偶然把培养好的菌体放在4度了几个小时再诱导,上清表达!);低浓度IPTG;在较低OD值时候诱导(见资料这么说过,自己没试过)
9楼2010-06-22 18:14:17
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
直接裂解不行么?
3楼2010-06-22 16:34:53
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):是的,虽然表达量高,但是这个缺点也实在是让人有点头疼! 2010-06-22 18:28:18
换载体是一方面;另外,高表达都会产生包涵体,这是大肠杆菌表达的一个缺点!
梦在路就在!
4楼2010-06-22 16:47:56
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

怎么直接裂解啊?我的目的产物是酶
平和悦衲!
5楼2010-06-22 16:48:30
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