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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌表达问题
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-06-22 18:14:17:
低温过夜诱导，诱导前必须把培养的菌体冷却，我都是给泡在冰水混合物中（一师姐的蛋白曾经包涵体表达，一次偶然把培养好的菌体放在4度了几个小时再诱导，上清表达！）；低浓度IPTG；在较低OD值时候诱导（见资料这 ...

谢谢啊  低IPTG我试过了，低OD也试过了  没有效果啊 冷却菌体我还没有试过  试试看
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平和悦衲！
11楼2010-06-23 09:09:21
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~包涵体复性确实是个难题~~有的时候很难得到自己的蛋白的，尤其是大KD的蛋白~~ 2010-06-23 12:46:37
再不行就建议你换载体、换菌株。不建议做包涵体复性，不看好它。
尝试其他诱导条件的时候就可以设计其他载体的引物发出去。如果诱导条件尝试不成功，马上就可以投入新载体的构建，不耽误时间。
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12楼2010-06-23 09:37:23
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
好的，有没有什么特殊的质粒或是菌株啊？总得有点针对性吧
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平和悦衲！
13楼2010-06-23 10:27:02
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泡泡9706

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-24 09:25:16
如果是因为蛋白产生太快不能正确折叠的话，低温诱导就行，如果还不行的话，那就是你的蛋白在大肠内不能折叠成有活性的形式，就得换载体换宿主优化密码子
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14楼2010-06-23 11:14:52
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月月大可

木虫 (著名写手)
一师兄做包涵体复性做了好久，最后对他自己的蛋白给的结论就是：复性----死路一条！
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15楼2010-06-23 12:50:43
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-24 08:35:09
最简单的，改善诱导条件，低IPTG，低转速，低温。还有可能是你用的缓冲也有问题，换一下缓冲液试试。
不行就换载体，换菌株。
再不行就麻烦了。小蛋白可以考虑包涵体复性，大蛋白就改成酵母或真核细胞（Hi5，
293等）表达吧。
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
16楼2010-06-23 13:22:50
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
恩，直接做真核的还好一些~
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17楼2010-06-23 13:29:18
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-06-23 13:29:18:
恩，直接做真核的还好一些~

感谢啊，尝试换一下菌株吧，希望能有好结果！
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平和悦衲！
18楼2010-06-24 08:32:25
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
MM实验加油啊~
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19楼2010-06-24 09:18:28
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青梅煮酒17

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们是战友，一起加油，期待你的好消息。
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20楼2012-08-08 18:06:44
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