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haoqian6135

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Originally posted by 月月大可 at 2010-06-22 18:14:17:
低温过夜诱导，诱导前必须把培养的菌体冷却，我都是给泡在冰水混合物中（一师姐的蛋白曾经包涵体表达，一次偶然把培养好的菌体放在4度了几个小时再诱导，上清表达！）；低浓度IPTG；在较低OD值时候诱导（见资料这 ...

谢谢啊低IPTG我试过了，低OD也试过了没有效果啊冷却菌体我还没有试过试试看

平和悦衲！

11楼2010-06-23 09:09:21

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月月大可

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~包涵体复性确实是个难题~~有的时候很难得到自己的蛋白的，尤其是大KD的蛋白~~ 2010-06-23 12:46:37

再不行就建议你换载体、换菌株。不建议做包涵体复性，不看好它。
尝试其他诱导条件的时候就可以设计其他载体的引物发出去。如果诱导条件尝试不成功，马上就可以投入新载体的构建，不耽误时间。

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12楼2010-06-23 09:37:23

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haoqian6135

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好的，有没有什么特殊的质粒或是菌株啊？总得有点针对性吧

平和悦衲！

13楼2010-06-23 10:27:02

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泡泡9706

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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-24 09:25:16

如果是因为蛋白产生太快不能正确折叠的话，低温诱导就行，如果还不行的话，那就是你的蛋白在大肠内不能折叠成有活性的形式，就得换载体换宿主优化密码子

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14楼2010-06-23 11:14:52

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月月大可

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一师兄做包涵体复性做了好久，最后对他自己的蛋白给的结论就是：复性----死路一条！

15楼2010-06-23 12:50:43

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goodwish

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-24 08:35:09

最简单的，改善诱导条件，低IPTG，低转速，低温。还有可能是你用的缓冲也有问题，换一下缓冲液试试。
不行就换载体，换菌株。
再不行就麻烦了。小蛋白可以考虑包涵体复性，大蛋白就改成酵母或真核细胞（Hi5，
293等）表达吧。

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生命的海洋里，我是蓝色的一滴

16楼2010-06-23 13:22:50

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liyong1981

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恩，直接做真核的还好一些~

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17楼2010-06-23 13:29:18

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haoqian6135

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Originally posted by liyong1981 at 2010-06-23 13:29:18:
恩，直接做真核的还好一些~

感谢啊，尝试换一下菌株吧，希望能有好结果！

平和悦衲！

18楼2010-06-24 08:32:25

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liyong1981

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MM实验加油啊~

19楼2010-06-24 09:18:28

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青梅煮酒17

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我们是战友，一起加油，期待你的好消息。

20楼2012-08-08 18:06:44

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