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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白酶在大肠杆菌表达的问题
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SAFC

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白酶在大肠杆菌表达的问题已有7人参与

请教一下，为什么重组菌株在牛奶平板上有透明圈，而在LB培养基中IPTG诱导后却没有蛋白表达呢？金币相赠
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1楼2010-05-30 21:51:52
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wj_21cn

木虫 (正式写手)
SAFC(金币+1): 2010-05-31 08:39:35
SAFC(金币+1): 2010-05-31 08:43:52
引用回帖:
Originally posted by SAFC at 2010-05-30 21:51:52:
请教一下，为什么重组菌株在牛奶平板上有透明圈，而在LB培养基中IPTG诱导后却没有蛋白表达呢？金币相赠

质粒丢失了？
有没有忘记加抗生素啊，要不抗生素失效？
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2楼2010-05-30 22:36:12
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ottolzm

木虫 (正式写手)
SAFC(金币+1): 2010-05-31 08:39:44
这个问题 很可能是抗生素筛选的问题 重新配置抗生素试试
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3楼2010-05-31 08:26:43
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SAFC

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wj_21cn at 2010-05-30 22:36:12:


质粒丢失了？
有没有忘记加抗生素啊，要不抗生素失效？

牛奶平板也是加有氨苄的。对照在牛奶平板上是没有透明圈的。
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4楼2010-05-31 08:39:24
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甄伟

SAFC(金币+1): 2010-05-31 09:13:29
引用回帖:
Originally posted by SAFC at 2010-05-30 21:51:52:
请教一下，为什么重组菌株在牛奶平板上有透明圈，而在LB培养基中IPTG诱导后却没有蛋白表达呢？金币相赠

你有没有做PCR和酶切的鉴定，或者测序鉴定是不是重组成功，如果成功的话肯定就是IPTG诱导的问题或者是你跑蛋白的问题吧
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5楼2010-05-31 09:00:55
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SAFC

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 甄伟 at 2010-05-31 09:00:55:

你有没有做PCR和酶切的鉴定，或者测序鉴定是不是重组成功，如果成功的话肯定就是IPTG诱导的问题或者是你跑蛋白的问题吧

菌落PCR没有问题，是扩得出来的，连接方面应该没有问题的。我是在37℃诱导的。老板说可以尝试低温诱导，低温诱导一般是什么条件呢？？有经验的虫友请教一下。
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6楼2010-05-31 09:16:48
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jasco

木虫 (正式写手)
SAFC(金币+1): 2010-05-31 10:28:29
低温诱导可以做18度，或者从18度到37度做梯度
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7楼2010-05-31 10:24:26
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gengce

金虫 (正式写手)
有活性有功能就能部分证明你的蛋白是存在的，你所谓的IPTG诱导没有得到你要的蛋白是怎么检测的？sds-page？目测条带？标签是什么标签的？
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8楼2010-07-22 15:56:50
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ronghuan

银虫 (小有名气)
可以做个sds-page，使用120KD Maker看有没有你要蛋白的条带
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9楼2010-07-22 20:41:43
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