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张丽慧818

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[交流] 【求助/交流】蛋白酶抑制剂是必须从第一步匀浆就得加进去吗？已有3人参与

提取酶的时候，蛋白酶抑制剂必须从第一步的匀浆开始加吗？还是之后的硫酸铵分级开始加就行呢？超高速离心时，是不是得加有蛋白酶抑制剂？麻烦指点一下下~~~~谢谢！

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1楼 2011-01-20 21:32:55

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三磷酸腺苷

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在细胞裂解的同时就得加

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2楼2011-01-20 21:51:34

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月月大可

木虫 (著名写手)

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一般加的都是蛋白水解酶抑制剂，防止细胞破碎后蛋白水解酶水解目的蛋白。

应该是在破碎buffer中加入，如果纯化到后期，蛋白水解酶已经被出去，可以不加。但是如果蛋白长期防止最好加入抑菌剂。

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3楼2011-01-20 22:47:36

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zhp1984816

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是的，在开始匀浆之前就加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白水解酶水解蛋白，此外，你要是做的目的蛋白有磷酸化的话，还得在一开始加入磷酸化酶抑制剂，防止碱性磷酸酶使蛋白去磷酸化。

赞一下(2人)

相信自己的路。坚持并享受其中。

4楼2011-01-20 23:39:11

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