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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sun880806

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白酶解后 得到的肽 比蛋白还多 求高人解释一下

本人 用碱性蛋白酶 酶解蛋白,蛋白浓度100mg/mL,酶解后用三氯乙酸法测酸溶肽,标准物质选的是谷胱甘肽,测得的酸溶肽竟然达到了120mL/mL,我不知道这样的结果是不是合理,恳请高人帮忙解释一下
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小硕
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sun880806(金币+3): 有帮助 2012-03-07 12:16:53
蛋白浓度100mg/mL,酸溶肽竟然达到了120mL/mL,两个单位不统一呀,另外我个人觉得是否实验误差,按照质量守恒定律,不可能质量突然增加的,浓度增加了是否没有计算酶蛋白量呀。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-03-06 09:07:52
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好

请问楼主是怎么测定酶解肽的浓度的?可以交流一下吗?
人生的三大悲剧:不知道选择,不坚持选择,不断选择!
5楼2012-03-07 15:14:22
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sun880806

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 396101466 at 2012-03-07 15:14:22:
请问楼主是怎么测定酶解肽的浓度的?可以交流一下吗?

您好,我的测定方法如下:
取5mL酶解液,加5mL l5%(w/w)的三氯乙酸(TCA)溶液,混匀后静置10min,3500r/min离心10min,上清稀释至多肽浓度为1~10 mg/mL,取稀释液3mL加入2mL双缩脲试剂,混匀后静置20min。参比液以3mL蒸馏水和2mL双缩脲组成。在分光光度计可见光540nm处测定吸光值,查找标准曲线即可得酸溶肽含量 (mg/mL)
欢迎给出意见
小硕
6楼2012-03-09 15:04:32
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好

引用回帖:
6楼: Originally posted by sun880806 at 2012-03-09 15:04:32:
您好,我的测定方法如下:
取5mL酶解液,加5mL l5%(w/w)的三氯乙酸(TCA)溶液,混匀后静置10min,3500r/min离心10min,上清稀释至多肽浓度为1~10 mg/mL,取稀释液3mL加入2mL双缩脲试剂,混匀后静置20min。参比液 ...

谢谢啦!领教了.......
人生的三大悲剧:不知道选择,不坚持选择,不断选择!
7楼2012-03-10 10:20:54
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liun119

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sun880806 at 2012-03-06 16:17:07:
多谢了,酸溶肽是120mg/mL,不好意思,帖子中写错了;刚开始我也怀疑是误差,可不止一个样品出现这种情况。我确实没计算酶蛋白的量,这点非常感谢您的提醒。不过,我考虑,这种情况跟标准品有没有关系呀,我用的 ...

有理,不了解。 但是可以把标准做个全扫,样品也做个全扫,一般都会有不一波长下的峰的。 选两个不同波长都出峰的,做个定量, 看看结果是不是一样, 就知道540处是不是有更小的基团对它有影响了吧?
8楼2012-03-10 23:20:51
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xifu521

新虫 (初入文坛)

★ ★
树树8013: 金币+2, 谢谢新虫友解答交流,欢迎常来。 2012-03-29 18:54:33
楼主 建议你加测一个项 pH值,因为双缩脲反应时需要在碱性条件下进行的,3ml酸提液加2ml双缩脲试剂,pH值不一定会是碱性,只是猜测。
我的方法是1ml酸提液加4ml双缩脲试剂。
9楼2012-03-22 14:38:50
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宋某

铜虫 (初入文坛)


sweety: 金币+1, 鼓励新虫发帖 2012-04-20 10:35:36
请教一下楼主,这个测定方法具体叫什么方法,和测定蛋白酶活力时的福林法有点相似,正如楼上所说,应该用碳酸钠做稀释液吧。
Iamaslowwalker,butIneverwalkbackwards.
10楼2012-04-20 10:03:46
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普通回帖

sun880806

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by 留级生2005 at 2012-03-06 09:07:52:
蛋白浓度100mg/mL,酸溶肽竟然达到了120mL/mL,两个单位不统一呀,另外我个人觉得是否实验误差,按照质量守恒定律,不可能质量突然增加的,浓度增加了是否没有计算酶蛋白量呀。

多谢了,酸溶肽是120mg/mL,不好意思,帖子中写错了;刚开始我也怀疑是误差,可不止一个样品出现这种情况。我确实没计算酶蛋白的量,这点非常感谢您的提醒。不过,我考虑,这种情况跟标准品有没有关系呀,我用的标准品是谷胱甘肽,而酶解产物是分子量更小的肽,酶解暴露出更多与显色剂发生反应的基团,导致吸光度增加;因此,根据谷胱甘肽显色反应得到的标准曲线计算得来的肽含量会比较高,而不是真正的质量增加。说的比较乱,您觉得我说的有没有道理呀?
小硕
3楼2012-03-06 16:17:07
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sun880806 at 2012-03-06 16:17:07:
多谢了,酸溶肽是120mg/mL,不好意思,帖子中写错了;刚开始我也怀疑是误差,可不止一个样品出现这种情况。我确实没计算酶蛋白的量,这点非常感谢您的提醒。不过,我考虑,这种情况跟标准品有没有关系呀,我用的 ...

分析的不错,挺好的。
4楼2012-03-07 09:07:40
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