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【求助/交流】分离产蛋白酶菌株
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我想从海水中分离产蛋白酶的菌株，现在有两个方案，不知道哪个更合理。 1、将不同稀释度的海水涂布在2116E培养基，先从海水中分离出不同的菌株，然后将这些菌株分别点种于酪蛋白琼脂培养基上，测量菌落直径以及透明圈直径，最后对分泌蛋白酶的菌株进行鉴定。 2、直接将不同稀释梯度的海水涂布于酪蛋白琼脂培养基，测量菌落直径以及透明圈直径，对菌株进行鉴定。 这两个方法哪个写论文的时候更合理？ 我现在是用的海水配制的培养基，可是我们学校这边的海水不是很清澈，用滤纸过滤还是有些浑浊，离心一下是很清澈，但这样会不会把一些营养物质除去了？还有就是我用酪蛋白琼脂筛选出来的菌株，在不同的平板上很可能筛选到的是同一种菌，我怎么鉴定它们是不是同一种？我看了一些文章说从海水中分离出来多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要对我分离出来的每个菌都进行鉴定吗？那样工作量会很大。 [ Last edited by nancyyazi on 2011-4-6 at 19:25 ] |
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brightfuture01
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冼亮淀粉酶
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nancyyazi(金币+1):谢谢参与
nancyyazi(金币+10): 2011-04-06 17:55:36
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~奖励一下~ 2011-04-06 23:30:20
nancyyazi(金币+1):谢谢参与
nancyyazi(金币+10): 2011-04-06 17:55:36
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要知道用哪种方法，就首先要知道筛选的原理。蛋白酶是细胞必需的，每种生物都会产生，用于降解自身钝化的蛋白质，所以就要看你需要的蛋白酶产生菌是怎样的微生物了，或者说你需要微生物来产生具有怎样的特性的蛋白酶。 撇开这个，先说说2116E和酪蛋白琼脂培养基的配方。我在网上找到这两个配方： 2116E培养基：http://wenku.baidu.com/view/0ae2124c767f5acfa1c7cdf3.html 含有酵母膏和蛋白胨，都是很好的碳源和氮源，但是不能指示蛋白酶产生菌的降解圈 酪蛋白琼脂培养基：http://www.hopebiol.com/standard/ldbqz.html 牛肉浸膏是很好的碳源和氮源，还含有酪蛋白，能指示蛋白酶产生菌的降解圈。 但是酵母膏、牛肉浸膏和蛋白胨是不一样的，可能导致微生物生长状况不一样。2116E培养基上能生长的微生物不一定能在酪蛋白琼脂培养基上良好生长和产生降解圈，所以建议直接使用酪蛋白琼脂培养基。你想想，如果把2116E培养基上能生长的微生物全部都接种到酪蛋白琼脂培养基上，你得多做多少事情，还不如直接涂布在酪蛋白琼脂培养基平板上看水解圈的直接。如果你投稿论文，审稿人有可能会问这个问题，你可要预先做好思想准备。当然，如果你还有别的想法，必须用第一种方法，就就当我没说过吧。 有个问题需要注意，海水和模拟海水弄出来的营养盐或者人工海水都是不同的，所以培养基要用海水来配。海水采集的时候最好别靠近河、陆地和港口，以防盐分不好和有油污等物污染，采集回来之后最好高温高压灭菌，杀死里面的微生物，不灭菌，放久了里面长得花花绿绿的全是水藻，说不定还有线虫之类的恶心东西。可以先过滤再灭菌，灭菌过后放着不管，到配培养基的时候再过滤一次。当然，如果不过滤也不灭菌，就那么放在实验室也行，那就美其名曰：陈海水，也是可以发文章的。 我用海水来筛选过淀粉酶产生菌，筛得到的个别微生物跟陆地上采集的样品筛出来的看着不一样，而且就是红树林泥土样品，用海水和淡水来配置培养基，筛选出来的微生物生长情况也是不同的。 于是高下立判—— |
3楼2011-04-06 00:37:37
4楼2011-04-06 03:01:35
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哪里和 抑菌圈扯上关系了？？？？？ 7楼2011-04-06 14:33:01
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冼亮淀粉酶
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rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-06 23:31:05
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“我现在是用的海水配制的培养基，可是我们学校这边的海水不是很清澈，用滤纸过滤还是有些浑浊。” 做实验最严谨的是需要保证可重复性，所以实验用的试剂药品包括水都最好是能保持一致的，如果海水不清澈，那就说明要么是有人类活动的痕迹了，是靠近港口或者内陆河交汇之类的，或者是城市污水排放造成，要么就是特别严重的洋流，不过基本不可能了，所以这种海水的成分可能不能保持恒定，所以你下一次采集海水样品估计跟上一次的有一点不同。这种海水即使是离心之后能确保非常澄清，那也不应该用。成分保持恒定的海水应该是在不靠近陆地，人类活动不太频繁的地方采集的，有SCI文章用的就是在海面以下多少米采集的，而且记录经纬度。当然，如果你不是要求那么严谨，就不用这样做，但是假如是想投稿SCI论文，那么就要思考这个问题，因为审稿人可能会问这个关于实验重复性的问题，编辑倒是不会问的。其实实际操作起来也不算太难的，因为是靠海的地方，不说客轮，渔船也是有的，渔船作业的地方一般不靠岸的，就是人类活动较少的地方，人类活动太频繁的地方鱼类不多，被吓跑了，你就跟他们联系好，带点酒菜上去唠嗑一下，实在不行就出点钱当是船票就搞定了，记得带上学生证，不要被怀疑成偷鱼的，带上装海水的桶罐，绳子船上如果有就不用带。用绳子系好铁桶，沉下去，再拉上来，这样就没有渔船的油污了。 “离心一下是很清澈，但这样会不会把一些营养物质除去了” 离心只是把一些悬浊物离心下来而已，即使不离心，用这样的海水来配置培养基，灭菌之后还是浑浊的。还是上面说的，搭个渔船去采集海面下的海水，就不会浑浊了。离心不会把营养物质去掉的，而且你要海水的原因是需要里面的各种纷繁复杂的盐，营养物在配置培养基的时候会自己加进去的。尽量采集成分比较恒定的海水，搭个渔船去采集海面下的海水，有机物污染比较少，成分比较恒定。 “还有就是我用酪蛋白琼脂筛选出来的菌株，在不同的平板上很可能筛选到的是同一种菌，我怎么鉴定它们是不是同一种？我看了一些文章说从海水中分离出来多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要对我分离出来的每个菌都进行鉴定吗？” 首先需要区分“同一种菌”和“菌株”的概念，“种”是分类学上的概念，界门纲目科属种亚种变种；“株”不是分类学上的概念，带有很大人为的意义。比如说我筛选得到一株“真菌菌株”命名为“真菌1-95”，经过ITS序列和形态学鉴定之后，发现是属于青霉属，可能为嗜松青霉（可以看我的已授权专利）。在这个专利里，“种”为“青霉属嗜松青霉种”，“菌株”为“青霉1-95”。当然，很多人筛选得到的微生物可以在分类学上隶属于同一种菌，这些微生物在分类学上是相同的，但可以被他们的拥有者命名为不同的名称，就是属于不同实验室的不同的“菌株”。虽然属于同一种菌，但是它们的基因组可能会稍有不同，所产的酶或者酶的性质也会有不同的。 在不同的平板上生长出来的微生物是同一种菌的情况是绝对可以存在的，而且大多数情况下都是这样的，当然你也不必全都鉴定，那样确实很花费时间金钱，先结合实验室需要，你到底需要什么样的菌，什么样的蛋白酶？先从菌和酶的特性入手筛选，偏酸偏碱中性？形态上一样的菌可能是不同的种，也可能产酶情况不一样，需要结合再深一层的要求来筛选，而不要看着一大批菌长得像就只保留其中的某一个，那样就不是筛选了。先问清楚导师，接下来需要什么样的菌什么样的酶，不然就留下一大堆平板不知道下一步怎么做，丢也不是，不丢也不是，还碍地方。 至于文章里说筛选得到多少菌株，这也不是严谨的表述方式，严谨的应该是说筛选得到多少株菌，它们分别产什么酶，隶属于什么属，不一定要到种，但属是应该到的。我觉得你说的那篇可能是国内的文章。 直接在2116E里面加酪蛋白应该是可以的。 |
12楼2011-04-06 19:56:09
14楼2011-04-08 14:24:50
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冼亮淀粉酶
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