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nancyyazi

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】分离产蛋白酶菌株

我想从海水中分离产蛋白酶的菌株，现在有两个方案，不知道哪个更合理。
1、将不同稀释度的海水涂布在2116E培养基，先从海水中分离出不同的菌株，然后将这些菌株分别点种于酪蛋白琼脂培养基上，测量菌落直径以及透明圈直径，最后对分泌蛋白酶的菌株进行鉴定。
2、直接将不同稀释梯度的海水涂布于酪蛋白琼脂培养基，测量菌落直径以及透明圈直径，对菌株进行鉴定。
这两个方法哪个写论文的时候更合理？

我现在是用的海水配制的培养基，可是我们学校这边的海水不是很清澈，用滤纸过滤还是有些浑浊，离心一下是很清澈，但这样会不会把一些营养物质除去了？还有就是我用酪蛋白琼脂筛选出来的菌株，在不同的平板上很可能筛选到的是同一种菌，我怎么鉴定它们是不是同一种？我看了一些文章说从海水中分离出来多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要对我分离出来的每个菌都进行鉴定吗？那样工作量会很大。

[ Last edited by nancyyazi on 2011-4-6 at 19:25 ]

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1楼 2011-04-05 20:02:56

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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★
nancyyazi(金币+1):谢谢参与
nancyyazi(金币+10): 2011-04-06 17:55:36
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~奖励一下~ 2011-04-06 23:30:20

要知道用哪种方法，就首先要知道筛选的原理。蛋白酶是细胞必需的，每种生物都会产生，用于降解自身钝化的蛋白质，所以就要看你需要的蛋白酶产生菌是怎样的微生物了，或者说你需要微生物来产生具有怎样的特性的蛋白酶。

撇开这个，先说说2116E和酪蛋白琼脂培养基的配方。我在网上找到这两个配方：
2116E培养基：http://wenku.baidu.com/view/0ae2124c767f5acfa1c7cdf3.html
含有酵母膏和蛋白胨，都是很好的碳源和氮源，但是不能指示蛋白酶产生菌的降解圈
酪蛋白琼脂培养基：http://www.hopebiol.com/standard/ldbqz.html
牛肉浸膏是很好的碳源和氮源，还含有酪蛋白，能指示蛋白酶产生菌的降解圈。

但是酵母膏、牛肉浸膏和蛋白胨是不一样的，可能导致微生物生长状况不一样。2116E培养基上能生长的微生物不一定能在酪蛋白琼脂培养基上良好生长和产生降解圈，所以建议直接使用酪蛋白琼脂培养基。你想想，如果把2116E培养基上能生长的微生物全部都接种到酪蛋白琼脂培养基上，你得多做多少事情，还不如直接涂布在酪蛋白琼脂培养基平板上看水解圈的直接。如果你投稿论文，审稿人有可能会问这个问题，你可要预先做好思想准备。当然，如果你还有别的想法，必须用第一种方法，就就当我没说过吧。

有个问题需要注意，海水和模拟海水弄出来的营养盐或者人工海水都是不同的，所以培养基要用海水来配。海水采集的时候最好别靠近河、陆地和港口，以防盐分不好和有油污等物污染，采集回来之后最好高温高压灭菌，杀死里面的微生物，不灭菌，放久了里面长得花花绿绿的全是水藻，说不定还有线虫之类的恶心东西。可以先过滤再灭菌，灭菌过后放着不管，到配培养基的时候再过滤一次。当然，如果不过滤也不灭菌，就那么放在实验室也行，那就美其名曰：陈海水，也是可以发文章的。

我用海水来筛选过淀粉酶产生菌，筛得到的个别微生物跟陆地上采集的样品筛出来的看着不一样，而且就是红树林泥土样品，用海水和淡水来配置培养基，筛选出来的微生物生长情况也是不同的。

于是高下立判——