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新版西游记

木虫 (著名写手)

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[求助] 关于Rosetta(DE3)菌株用来做蛋白表达的相关问题。已有2人参与

Rosetta(DE3)菌株相较于其他表达菌株，如BL21(DE3)，摇菌时间长才能达到OD要求。那么质粒转化Rosetta后，挑菌后应该怎么活化？氨苄青霉素和氯霉素的浓度？摇菌时间？等等。本人有一个蛋白，稀有密码子较多，还有两个连续排在一起的，所以使用Rosetta，问题是要么摇菌摇不起来，要么是耗时很长，大概17h，然后做小量诱导表达没有目的蛋白。

不完全统计，这个蛋白已经耗费我好几个月了，还没有进展，觉得生活好没有希望啊。。。

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勇往直前

1楼2014-04-14 10:02:14

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woolley

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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新版西游记(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-14 11:42:16
新版西游记: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-04-14 15:03:32

使用双抗性是会对菌株的生长有影响，你可以尝试将抗生素的浓度都减半
不过实际操作的时候没有感觉到Rosseta长的有多慢啊
你还可以尝试使用1/3浓度的抗生素，只要保证是双抗性就行
还有就是，你需要转化一下BL21的菌株，看看转化后是不是也长的很慢或者不好，如果是这样的话，可能是你要表达的蛋白有毒或者能抑制大肠杆菌生长