24小时热门版块排行榜    

查看: 2886  |  回复: 16

wh6125

铁虫 (初入文坛)

[求助] 做了原核表达,表达量很低,求助~~ 已有8人参与

用pET-28a构建的原核表达载体,带N端His标签,测序、酶切都正确,菌株用的是BL21(DE3),16℃ 8h、20h及30℃ 3h都有表达,但是表达量很低(见附件中红框标注),求助是应该优化表达条件还是换载体试试呢?这种表达量不能纯化吧?
图中依次为Marker,空载体(诱导前、后),目的蛋白(1、2诱导前),目的蛋白(1,2诱导后)
后面三条浅的是诱导后的空载体及目的蛋白沉淀
做了原核表达,表达量很低,求助~~
IMG_0730.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

楼主可以试试延长诱导时间,加大诱导剂量
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-03-06 15:07:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 15:07:55
楼主可以试试延长诱导时间,加大诱导剂量

我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么?
3楼2014-03-06 15:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wh6125 at 2014-03-06 15:40:21
我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么?...

可以试试看,你可以做三个,一个延长时间,一个加大剂量,一个两者都有
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-03-06 15:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 15:56:39
可以试试看,你可以做三个,一个延长时间,一个加大剂量,一个两者都有...

好的,谢谢
5楼2014-03-06 16:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changbinzh

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-07 13:39:33
或者换个载体 我以前也遇到你这样的情况 换个载体表达量就上来了
6楼2014-03-07 11:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-09 00:55:09
IPTG不一定越高越好,我用过0.1和0.5mM的,效果都不错~关于诱导时间,要是延长时间不建议培养温度过高,防止蛋白降解,做表达量就是要各种摸条件,过程很痛苦,生活很艰辛~
7楼2014-03-07 14:20:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋水素心

银虫 (小有名气)

37度试试?
认真过好每一天!
8楼2014-03-08 22:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋水素心

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 秋水素心 at 2014-03-08 22:18:37
37度试试?

30度3h貌似时间有点短
认真过好每一天!
9楼2014-03-08 22:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-09 11:15:25
共转pRARE2试试看,提高稀有密码子的表达。
希望对你有帮助。
10楼2014-03-09 09:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wh6125 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见