24小时热门版块排行榜    

查看: 1917  |  回复: 16
【悬赏金币】回答本帖问题,作者wh6125将赠送您 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

[求助] 做了原核表达,表达量很低,求助~~已有8人参与

用pET-28a构建的原核表达载体,带N端His标签,测序、酶切都正确,菌株用的是BL21(DE3),16℃ 8h、20h及30℃ 3h都有表达,但是表达量很低(见附件中红框标注),求助是应该优化表达条件还是换载体试试呢?这种表达量不能纯化吧?
图中依次为Marker,空载体(诱导前、后),目的蛋白(1、2诱导前),目的蛋白(1,2诱导后)
后面三条浅的是诱导后的空载体及目的蛋白沉淀
做了原核表达,表达量很低,求助~~
IMG_0730.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-09 00:55:09
IPTG不一定越高越好,我用过0.1和0.5mM的,效果都不错~关于诱导时间,要是延长时间不建议培养温度过高,防止蛋白降解,做表达量就是要各种摸条件,过程很痛苦,生活很艰辛~
7楼2014-03-07 14:20:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

楼主可以试试延长诱导时间,加大诱导剂量
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-03-06 15:07:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 15:07:55
楼主可以试试延长诱导时间,加大诱导剂量

我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么?
3楼2014-03-06 15:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wh6125 at 2014-03-06 15:40:21
我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么?...

可以试试看,你可以做三个,一个延长时间,一个加大剂量,一个两者都有
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-03-06 15:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 夏至,要不要硕博联谊 +7 我是王小帅 2024-06-21 10/500 2024-06-27 13:41 by 我是王小帅
[基金申请] 今年什么时候会评啊 +9 lancet0903 2024-06-24 9/450 2024-06-27 13:22 by yrzhu1984
[找工作] offer选择 +10 羡渔樵 2024-06-26 10/500 2024-06-27 12:19 by chenzhikai
[基金申请] 博后面上今天下午会公布吗?大家有无消息? +10 地理学1995 2024-06-24 14/700 2024-06-27 11:24 by jackiddd
[论文投稿] 我在写关于多维空间的论文,希望能与大家交流,准备在science上发表 +9 lgf519 2024-06-24 11/550 2024-06-27 11:20 by f1yfish
[基金申请] 博后面上今天下午会公布吗?有无消息? +26 hajkdfdf 2024-06-24 45/2250 2024-06-27 09:19 by kyukitu
[基金申请] 专科院校申请国自然 +17 孤单12站 2024-06-24 26/1300 2024-06-27 08:45 by 3001160025
[公派出国] CSC博士联培对将来就业有用吗 +5 也就这样 2024-06-22 5/250 2024-06-26 20:55 by tshenbin
[考博] 对象没有,还非常想读博,难以抉择 +28 pvrw0224 2024-06-23 52/2600 2024-06-26 20:22 by pvrw0224
[基金申请] 自然基金变化?? +15 今晚推荐22 2024-06-21 25/1250 2024-06-26 19:40 by 朋友别哭010
[有机交流] 酚羟基甲基化 10+4 A好运来啦啦啦 2024-06-25 6/300 2024-06-26 10:08 by 88817753
[有机交流] 过柱子,产品,杂质在是 pe:ea=100:1 也一起出来? +5 w256 2024-06-25 5/250 2024-06-26 09:31 by 小木木cc
[基金申请] 这样的说辞是上会了吗 +12 学员d3zYCz 2024-06-24 15/750 2024-06-25 22:05 by 3115321
[基金申请] 博后面上到底什么时候出结果??? +7 爱学lsy 2024-06-24 7/350 2024-06-25 19:24 by 暴走的蒜泥
[基金申请] 能看出是否上会了吗 +10 articlefan 2024-06-23 15/750 2024-06-25 16:05 by 请慎重修改昵称
[基金申请] 2024安徽省哲社立项名单公示 +3 robin_work 2024-06-24 6/300 2024-06-25 14:37 by Pickfoot
[教师之家] 复旦夏同学退学理由说明,哪儿可以下载? +7 苏东坡二世 2024-06-21 8/400 2024-06-25 12:42 by 药嘿1233
[硕博家园] 数据不好 +5 Hetai 2024-06-23 7/350 2024-06-25 12:37 by 1591099
[金属] EBSD的解析率只有10% +3 wallace6666 2024-06-20 7/350 2024-06-24 16:52 by wallace6666
[催化] 求助原位红外 +3 jfdhj 2024-06-21 7/350 2024-06-24 10:52 by qvhm2609
信息提示
请填处理意见