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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 做了原核表达，表达量很低，求助~~
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道是不是表达真核蛋白，可以试试rosetta菌种，其实这个量已经可以纯化了。不知道你想要得到多大量的蛋白。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2014-03-09 12:03:48
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dingchaoyue

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我建议先优化条件，换载体的话，也许表达量可能也不高（之前我也遇到过这种情况，是PET28a的载体，换了GST后没有觉得表达明显增加）。
你可以做个不同IPTG的浓度来验证表达量，温度的话不要太高，因为如果你用这个蛋白做活性分析的话，那么温度高也许会有影响；
其实，我觉得你这个载体可以用来纯化了，你想要多的话，可以多摇菌来诱导表达。你摇菌摇得多，然后纯化过柱时多过柱几遍，应该会达到你要纯化的量。
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12楼2014-03-09 12:39:31
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zhoucd07net

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换成带GST / MBP 标签的载体吧，
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13楼2014-03-10 12:34:07
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wh6125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by aofeng860308 at 2014-03-09 12:03:48
不知道是不是表达真核蛋白，可以试试rosetta菌种，其实这个量已经可以纯化了。不知道你想要得到多大量的蛋白。

师姐也说让我换换菌株，可是买不到rosetta的
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14楼2014-03-12 09:36:10
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守候的专属

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

37度4h试试，我们原来做大肠杆菌的表达都先做试管小试，表达条件可以是：15度过夜、20度8h、28度6h、37度4h等都有，一般IPTG诱导剂量影响不是很明显，我们用前都过滤下的。如果你那表达量还不能提高的话可以扩大瓶通过量来提高最终获得蛋白的量也可以的。
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15楼2014-03-21 11:23:08
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们也用过pET-28a+表达载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，表达的挺好的。
感觉LZ诱导剂量不够，或者诱导6h，效果应该好一些
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16楼2014-03-23 10:24:37
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Allen206

银虫 (小有名气)
先过个柱子看看，特异性好也说不定呢，
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不想说什么，，，，
17楼2014-04-08 16:30:37
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