24小时热门版块排行榜    

查看: 2482  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

[求助] 做了原核表达,表达量很低,求助~~已有8人参与

用pET-28a构建的原核表达载体,带N端His标签,测序、酶切都正确,菌株用的是BL21(DE3),16℃ 8h、20h及30℃ 3h都有表达,但是表达量很低(见附件中红框标注),求助是应该优化表达条件还是换载体试试呢?这种表达量不能纯化吧?
图中依次为Marker,空载体(诱导前、后),目的蛋白(1、2诱导前),目的蛋白(1,2诱导后)
后面三条浅的是诱导后的空载体及目的蛋白沉淀
做了原核表达,表达量很低,求助~~
IMG_0730.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们也用过pET-28a+表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达的挺好的。
感觉LZ诱导剂量不够,或者诱导6h,效果应该好一些
16楼2014-03-23 10:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

楼主可以试试延长诱导时间,加大诱导剂量
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-03-06 15:07:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 15:07:55
楼主可以试试延长诱导时间,加大诱导剂量

我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么?
3楼2014-03-06 15:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wh6125 at 2014-03-06 15:40:21
我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么?...

可以试试看,你可以做三个,一个延长时间,一个加大剂量,一个两者都有
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-03-06 15:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见