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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 做了原核表达，表达量很低，求助~~
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wh6125

铁虫 (初入文坛)

[求助] 做了原核表达，表达量很低，求助~~ 已有8人参与

用pET-28a构建的原核表达载体，带N端His标签，测序、酶切都正确，菌株用的是BL21(DE3)，16℃ 8h、20h及30℃ 3h都有表达，但是表达量很低（见附件中红框标注），求助是应该优化表达条件还是换载体试试呢？这种表达量不能纯化吧？
图中依次为Marker，空载体（诱导前、后），目的蛋白（1、2诱导前），目的蛋白（1，2诱导后）
后面三条浅的是诱导后的空载体及目的蛋白沉淀
做了原核表达，表达量很低，求助~~
IMG_0730.jpg
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1楼 2014-03-06 14:10:38
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wh6125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 15:56:39
可以试试看，你可以做三个，一个延长时间，一个加大剂量，一个两者都有...

好的，谢谢
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5楼2014-03-06 16:00:17
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
楼主可以试试延长诱导时间，加大诱导剂量
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-03-06 15:07:55
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wh6125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 15:07:55
楼主可以试试延长诱导时间，加大诱导剂量

我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么？
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3楼2014-03-06 15:40:21
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wh6125 at 2014-03-06 15:40:21
我用的是1mM的IPTG,还可以再加大用量么？...

可以试试看，你可以做三个，一个延长时间，一个加大剂量，一个两者都有
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-03-06 15:56:39
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