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sun880806

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白酶解后 得到的肽 比蛋白还多 求高人解释一下

本人 用碱性蛋白酶 酶解蛋白，蛋白浓度100mg/mL，酶解后用三氯乙酸法测酸溶肽，标准物质选的是谷胱甘肽，测得的酸溶肽竟然达到了120mL/mL，我不知道这样的结果是不是合理，恳请高人帮忙解释一下
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小硕
1楼 2012-03-05 23:11:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sun880806(金币+3): ★有帮助 2012-03-07 12:16:53
蛋白浓度100mg/mL，酸溶肽竟然达到了120mL/mL，两个单位不统一呀，另外我个人觉得是否实验误差，按照质量守恒定律，不可能质量突然增加的，浓度增加了是否没有计算酶蛋白量呀。
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sun880806
2楼2012-03-06 09:07:52
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好
请问楼主是怎么测定酶解肽的浓度的？可以交流一下吗？
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
5楼2012-03-07 15:14:22
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sun880806

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 396101466 at 2012-03-07 15:14:22:
请问楼主是怎么测定酶解肽的浓度的？可以交流一下吗？

您好，我的测定方法如下:
取5mL酶解液，加5mL l5％(w/w)的三氯乙酸(TCA)溶液，混匀后静置10min，3500r/min离心10min，上清稀释至多肽浓度为1～10 mg/mL，取稀释液3mL加入2mL双缩脲试剂，混匀后静置20min。参比液以3mL蒸馏水和2mL双缩脲组成。在分光光度计可见光540nm处测定吸光值，查找标准曲线即可得酸溶肽含量 (mg/mL)
欢迎给出意见
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小硕
6楼2012-03-09 15:04:32
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好
引用回帖:
6楼: Originally posted by sun880806 at 2012-03-09 15:04:32:
您好，我的测定方法如下:
取5mL酶解液，加5mL l5％(w/w)的三氯乙酸(TCA)溶液，混匀后静置10min，3500r/min离心10min，上清稀释至多肽浓度为1～10 mg/mL，取稀释液3mL加入2mL双缩脲试剂，混匀后静置20min。参比液 ...

谢谢啦！领教了.......
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
7楼2012-03-10 10:20:54
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liun119

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sun880806 at 2012-03-06 16:17:07:
多谢了，酸溶肽是120mg/mL，不好意思，帖子中写错了；刚开始我也怀疑是误差，可不止一个样品出现这种情况。我确实没计算酶蛋白的量，这点非常感谢您的提醒。不过，我考虑，这种情况跟标准品有没有关系呀，我用的 ...

有理，不了解。 但是可以把标准做个全扫，样品也做个全扫，一般都会有不一波长下的峰的。 选两个不同波长都出峰的，做个定量， 看看结果是不是一样， 就知道540处是不是有更小的基团对它有影响了吧？
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8楼2012-03-10 23:20:51
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xifu521

新虫 (初入文坛)
★ ★
树树8013: 金币+2, 谢谢新虫友解答交流，欢迎常来。 2012-03-29 18:54:33
楼主 建议你加测一个项 pH值，因为双缩脲反应时需要在碱性条件下进行的，3ml酸提液加2ml双缩脲试剂，pH值不一定会是碱性，只是猜测。
我的方法是1ml酸提液加4ml双缩脲试剂。
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9楼2012-03-22 14:38:50
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宋某

铜虫 (初入文坛)
★
sweety: 金币+1, 鼓励新虫发帖 2012-04-20 10:35:36
请教一下楼主，这个测定方法具体叫什么方法，和测定蛋白酶活力时的福林法有点相似，正如楼上所说，应该用碳酸钠做稀释液吧。
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Iamaslowwalker,butIneverwalkbackwards.
10楼2012-04-20 10:03:46
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普通回帖

sun880806

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 留级生2005 at 2012-03-06 09:07:52:
蛋白浓度100mg/mL，酸溶肽竟然达到了120mL/mL，两个单位不统一呀，另外我个人觉得是否实验误差，按照质量守恒定律，不可能质量突然增加的，浓度增加了是否没有计算酶蛋白量呀。

多谢了，酸溶肽是120mg/mL，不好意思，帖子中写错了；刚开始我也怀疑是误差，可不止一个样品出现这种情况。我确实没计算酶蛋白的量，这点非常感谢您的提醒。不过，我考虑，这种情况跟标准品有没有关系呀，我用的标准品是谷胱甘肽，而酶解产物是分子量更小的肽，酶解暴露出更多与显色剂发生反应的基团，导致吸光度增加；因此，根据谷胱甘肽显色反应得到的标准曲线计算得来的肽含量会比较高，而不是真正的质量增加。说的比较乱，您觉得我说的有没有道理呀？
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小硕
3楼2012-03-06 16:17:07
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sun880806 at 2012-03-06 16:17:07:
多谢了，酸溶肽是120mg/mL，不好意思，帖子中写错了；刚开始我也怀疑是误差，可不止一个样品出现这种情况。我确实没计算酶蛋白的量，这点非常感谢您的提醒。不过，我考虑，这种情况跟标准品有没有关系呀，我用的 ...

分析的不错，挺好的。
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4楼2012-03-07 09:07:40
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