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SAFC

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白酶在大肠杆菌表达的问题 已有7人参与

请教一下,为什么重组菌株在牛奶平板上有透明圈,而在LB培养基中IPTG诱导后却没有蛋白表达呢?金币相赠
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wj_21cn

木虫 (正式写手)

SAFC(金币+1): 2010-05-31 08:39:35
SAFC(金币+1): 2010-05-31 08:43:52
引用回帖:
Originally posted by SAFC at 2010-05-30 21:51:52:
请教一下,为什么重组菌株在牛奶平板上有透明圈,而在LB培养基中IPTG诱导后却没有蛋白表达呢?金币相赠

质粒丢失了?
有没有忘记加抗生素啊,要不抗生素失效?
2楼2010-05-30 22:36:12
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ottolzm

木虫 (正式写手)

SAFC(金币+1): 2010-05-31 08:39:44
这个问题 很可能是抗生素筛选的问题 重新配置抗生素试试
3楼2010-05-31 08:26:43
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SAFC

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wj_21cn at 2010-05-30 22:36:12:


质粒丢失了?
有没有忘记加抗生素啊,要不抗生素失效?

牛奶平板也是加有氨苄的。对照在牛奶平板上是没有透明圈的。
4楼2010-05-31 08:39:24
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甄伟

SAFC(金币+1): 2010-05-31 09:13:29
引用回帖:
Originally posted by SAFC at 2010-05-30 21:51:52:
请教一下,为什么重组菌株在牛奶平板上有透明圈,而在LB培养基中IPTG诱导后却没有蛋白表达呢?金币相赠

你有没有做PCR和酶切的鉴定,或者测序鉴定是不是重组成功,如果成功的话肯定就是IPTG诱导的问题或者是你跑蛋白的问题吧
5楼2010-05-31 09:00:55
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SAFC

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 甄伟 at 2010-05-31 09:00:55:

你有没有做PCR和酶切的鉴定,或者测序鉴定是不是重组成功,如果成功的话肯定就是IPTG诱导的问题或者是你跑蛋白的问题吧

菌落PCR没有问题,是扩得出来的,连接方面应该没有问题的。我是在37℃诱导的。老板说可以尝试低温诱导,低温诱导一般是什么条件呢??有经验的虫友请教一下。
6楼2010-05-31 09:16:48
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jasco

木虫 (正式写手)

SAFC(金币+1): 2010-05-31 10:28:29
低温诱导可以做18度,或者从18度到37度做梯度
7楼2010-05-31 10:24:26
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gengce

金虫 (正式写手)

有活性有功能就能部分证明你的蛋白是存在的,你所谓的IPTG诱导没有得到你要的蛋白是怎么检测的?sds-page?目测条带?标签是什么标签的?
8楼2010-07-22 15:56:50
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ronghuan

银虫 (小有名气)

可以做个sds-page,使用120KD Maker看有没有你要蛋白的条带
9楼2010-07-22 20:41:43
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