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草本凝香

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 请教大肠杆菌中蛋白表达后该如何处理

请教各位：我的多肽在大肠杆菌中诱导表达后，离心收集菌体沉淀，我想问的是这个沉淀用什么试剂重悬？我现在用的是PBS（pH8.0），不知道行不行？
还有一个问题：菌体沉淀只加某种重悬试剂，再与loading buffer混旋，煮沸上样跑电泳就可以吗？需不需要再加入裂解液之类的，我总觉得细菌都没有被裂解，跑出来的电泳条带会是全菌蛋白吗？不吝赐教，谢谢各位了

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1楼2011-05-13 20:20:19

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-05-16 09:00:23

引用回帖:

Originally posted by 草本凝香 at 2011-05-13 20:20:19:
请教各位：我的多肽在大肠杆菌中诱导表达后，离心收集菌体沉淀，我想问的是这个沉淀用什么试剂重悬？我现在用的是PBS（pH8.0），不知道行不行？
还有一个问题：菌体沉淀只加某种重悬试剂，再与loading buffer混旋 ...

可以的，生理盐水、PBS、Trisl-HCl等都可以的。如果只是用来电泳，直接加水，然后加loading buffer煮沸5min就是了，煮沸条件下细胞已经破碎了，都这样用，没问题的。