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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 共表达载体只表达出一个蛋白
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30937747

木虫 (小有名气)

[求助] 共表达载体只表达出一个蛋白

我用的是pETDuet-1共表达载体，移码突变的问题已经考虑过了，导师也看过应该不存在问题。我按顺序连了A、B两个基因上去，A和B基因的最后都带了终止密码子。电转至BL21后在30℃和37℃进行诱导表达（4h），但都是只表达了B这个蛋白，请问是什么原因?
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我依旧会努力.
1楼 2012-06-01 17:10:26
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回帖置顶 ( 共有2个 )

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
30937747: 回帖置顶 2012-06-17 08:56:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 30937747 at 2012-06-05 20:05:46
单独表达我已经在BL21里做过了,是没有问题的...

这种情况应该不会发生啊，共表达每个基因都有单独的启动子吗？
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Thank-you，so-blue.
6楼2012-06-06 09:24:21
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
30937747: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-06-08 23:22:28
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-09 13:35:18
30937747: 金币+1, 做出来了。 2012-06-17 08:56:41
30937747: 回帖置顶 2012-06-17 08:56:46
30937747: 金币+1, 感谢交流 2012-06-17 08:57:18
原核的共表达没做过，真核的共表达做过。我的建议：如果共表达载体只检测出一个目的蛋白，不妨换用双载体（比例1:1）共转化试一试？
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人生不是一场物质的盛宴，而是一次灵魂的修炼，使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
15楼2012-06-08 15:02:26
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普通回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-05 14:10:40
30937747: 金币+3, ★有帮助, 3ks 2012-06-05 20:05:17
30937747: 金币+1, 做出来了。 2012-06-17 08:55:51
30937747: 金币+1, 感谢交流 2012-06-17 08:57:26
pETDuet-1有两个单独的t7-MCS，两个基因前面是否都有t7。
如果两个基因都有t7,建议先将A单独表达看看，有可能A基因不适合在大肠中表达。
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Thank-you，so-blue.
2楼2012-06-05 10:35:10
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-06-05 10:35:10
pETDuet-1有两个单独的t7-MCS，两个基因前面是否都有t7。
如果两个基因都有t7,建议先将A单独表达看看，有可能A基因不适合在大肠中表达。

单独表达我已经在BL21里做过了,是没有问题的
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我依旧会努力.
3楼2012-06-05 20:05:46
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
30937747: 金币+3, ★有帮助 2012-06-06 08:51:00
30937747: 金币+1, 做出来了。 2012-06-17 08:56:00
pETDuet-1双启动子、A基因顺序有没有搞错？
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4楼2012-06-06 08:26:15
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by caoluoyuan at 2012-06-06 08:26:15
pETDuet-1双启动子、A基因顺序有没有搞错？

我都测序过的
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我依旧会努力.
5楼2012-06-06 08:50:52
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ilxly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 18:40:19
30937747: 金币+2, ★有帮助 2012-06-07 17:18:22
30937747: 金币+1, 做出来了。 2012-06-17 08:56:16
petduet本来也不是一定能共表达的，只是尝试的一个手段
你可以更换下AB基因在MCS上的顺序试试 只有试过了才知道行不行
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7楼2012-06-06 11:08:22
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zboter

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
30937747: 金币+2, ★有帮助 2012-06-07 17:18:47
30937747: 金币+1, 做出来了。 2012-06-17 08:56:21
你将两个基因的顺序对调一下呢？
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8楼2012-06-06 11:10:34
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101202139

铜虫 (小有名气)
不知道楼主现在这个问题解决了吗？我之前也遇到过类似的问题，现在正在尝试不同的方法争取能够实现共表达。
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9楼2012-06-06 15:24:23
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by susizheng at 2012-06-06 09:24:21
这种情况应该不会发生啊，共表达每个基因都有单独的启动子吗？...

共表达载体上有两个启动子两个MCS
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我依旧会努力.
10楼2012-06-07 17:17:56
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